利用酒糟发酵生产乙偶姻和转化生产四甲基吡嗪的方法

摘要

本发明公开了以酒糟为原料，利用微生物发酵生产生物香料乙偶姻和四甲基吡嗪的方法，属于生物工程技术领域。本发明在经酸度调节的新鲜酒糟中补充适量葡萄糖0～100g/kg，加入枯草芽孢杆菌（CCTCCNO：M208157）或地衣芽孢杆菌（CGMCC3961，3962，3963）中任一株培养的种子培养物后37℃发酵1～3天，能够大量产生生物香料乙偶姻。在此基础上，还可通过向上述发酵产物中添加铵盐来转化生产另一种生物香料四甲基吡嗪。本发明突出的优点是利用酒糟为原料，通过是否添加铵盐来有选择的控制生产生物香料乙偶姻或四甲基吡嗪的方法，既可有选择的获得不同高附加值的生物香料，又防止了酒糟污染环境，提升了酒糟的利用价值。

主权项

一种以酒糟为原料有选择的控制发酵生产乙偶姻或转化生产四甲基吡嗪的方法，其特征在于新鲜酒糟加入0.1‑1mol/L NaOH溶液调节酸度为0～5，补充葡萄糖0～100g/kg酒糟，加入菌株种子培养物发酵生产乙偶姻；在发酵产物中另外补充铵盐10～30g/kg酒糟，转化反应生产四甲基吡嗪；    所述的菌株种子培养物为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CCTCC NO：M208157、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CGMCC 3961，地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CGMCC 3962，地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CGMCC 3963中任一株，以液体或固体麸皮培养基，挑取一环菌株接种，37℃培养16～48h；液体种子培养基：以白酒酿造所用的原料为培养基成分，原料选用高粱、大麦、小麦、豌豆及其各种不同比例的混合配方制取液体种子培养基，制作方式为：原料样品经粉碎后，与水w/v按1︰1～4的比例混合后，蒸煮1‑5h，冷却后加入糖化酶10～50单位/g原料，于40～80℃保持2～10h，过滤、离心所得滤液，调节糖度为10~15oBx，调节pH为4～6；固体种子培养基：选用高粱、大麦、小麦、豌豆及其各种不同比例的混合配方制取固体种子培养基，制作方式为：原料样品经粉碎后，与水w/v按1︰0.5～2的比例混合后，80～100℃蒸煮30min；    乙偶姻发酵生产条件为：液体种子培养基按2%～10% v/w接种，或固体种子培养基按2%～10% w/w接种，37℃培养1～3d；转化反应生产四甲基吡嗪的条件为30～90℃反应1～3d；所述补充铵盐包括磷酸氢二铵、磷酸铵、磷酸二氢铵、柠檬酸铵、硫酸铵、碳酸氢铵中的一种。