使用HPLC-DAD同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法

摘要

本发明涉及一种HPLC-DAD同时测定丹红注射液中丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A6种有效成分含量的方法。实现本发明的具体技术方案是：分别制备供试品溶液和对照品溶液，采用HPLC-DAD法进行梯度洗脱，同时测定丹红注射液中丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A6种有效成分的含量，本发明方法简便、灵敏度高，重现性好，解决了目前丹红注射液中仅控制2种有效成分的含量，不能全面地反映丹红注射液质量的问题，以对丹红注射液的质量进行多指标的控制，为科学评价和有效控制丹红注射液的质量提供更科学的依据。

主权项

一种使用HPLC‑DAD同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法，其特征在于包括如下步骤：1）精密吸取丹红注射液，加超纯水稀释，摇匀，经滤膜滤过，即得供试品溶液；2）精密称取对照品丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A，分别置容量瓶中，加超纯水溶解，稀释，混匀，作为对照品储备溶液，于4℃ 冰箱内冷藏备用；3）再分别精密吸取6种对照品储备溶液，加超纯水稀释，准确配制丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的混合对照品溶液；4）用以下色谱条件进行HPLC‑DAD法检测：色谱柱：Eclipse XDB‑C18  4.6×150 mm，5 μm；流动相包括流动相A：乙腈和流动相B： 0.05% ‑ 0.1%（体积百分含量）的磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式，乙腈占流动相的体积百分比在下述范围内随着时间的增加而增加：0‑6 min，5%‑5%；6‑16 min， 5%‑15%；16‑30 min， 15%‑26%；35‑40 min， 26%‑27%；DAD检测器检测波长：检测丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、丹酚酸A 使用270‑290 nm，检测咖啡酸、迷迭香酸使用320 ‑340nm；柱温：25‑35℃，优选30℃；流速：0.7‑1.2 mL·min‑1；5）取混合对照品溶液，分别用超纯水稀释不同的倍数，取上述稀释混合对照品溶液与原混合对照品溶液各进样10 μl，记录色谱图和峰面积，分别以6种有效成分色谱峰的峰面积Y为纵坐标，以浓度X，μg·mL‑1为横坐标进行线性回归，得标准曲线的回归方程和相关系数；6）分别取不同批号的丹红注射液，按供试品溶液的制备方法配制样品溶液，分别进样10 μL，测定峰面积，每批样品测定3次，计算得到不同批号丹红注射液中丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A的含量。