鼠伤寒沙门氏菌的特异性FQ-PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种鼠伤寒沙门氏菌的特异性FQ-PCR检测方法及其中的核酸、引物对和探针序列；该检测方法包括以下步骤：根据鼠伤寒沙门氏菌全基因组序列中的保守且特异的STM4483基因序列SEQ ID：1，设计扩增引物对序列SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3及探针序列SEQ ID NO：4。提取样品DNA，FQ-PCR法扩增；通过FQ-PCR仪自带软件自动分析读取结果，判断样品是否含鼠伤寒沙门氏菌；所述判断具体为：若出现Ct＜35且呈对数增长的特异性扩增曲线，则说明样品中含鼠伤寒沙门氏菌；若未出现Ct＜35且呈对数增长的特异性扩增曲线，则样品中不含鼠伤寒沙门氏菌；采用本发明检测鼠伤寒沙门氏菌，检测时间短，成本底，检测结果特异，结果判定简单。

主权项

一种鼠伤寒沙门氏菌的特异性FQ‑PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，筛选出鼠伤寒沙门氏菌全基因组DNA中的保守且特异性的STM4493基因，其核苷酸序列由SEQ ID NO：1定义，并根据其序列设计扩增引物对和探针；引物对和探针序列如下：上游引物：5‑’CCGCGTTTTTGTATTGAAAGTTATC‑3’(SEQ ID NO：2)下游引物：5‑’AAACATCATGAACGGCCTGG‑3’(SEQ ID NO：3)探针：5‑’CAGCCAAAACATCAGCAGGCGATCA‑3’(SEQ ID NO：4)步骤二，提取样品DNA；步骤三，对样品DNA进行FQ‑PCR检测；FQ‑PCR反应体系如下：依次加入10×PCR反应缓冲液2.5μL，25mmol/L的Mg2+2.0μL，2.5mmol/L的dNTP1.0μL，5μM引物对1μL，5μM探针0.5μL，Taq酶1U，模板溶液0.5～2μL，最后用双蒸水补至25μL；扩增参数具体为：95℃预变性5min；之后开始扩增循环，每个循环的程序为：95℃变性30s，51℃退火30s，72℃延伸30s；共45个循环；最后72℃延伸10min，降温至16℃，结束；步骤四，通过FQ‑PCR仪自带软件自动分析读取FQ‑PCR检测结果，判断样品是否含鼠伤寒沙门氏菌；所述判断具体为：若出现Ct＜35且呈对数增长的特异性扩增曲线，则说明样品中含鼠伤寒沙门氏菌；若未出现Ct＜35且呈对数增长的特异性扩增曲线，则说明样品中不含鼠伤寒沙门氏菌。