主权项 |
一种啤酒中蛋白酶的定性检测方法,其特征在于包括以下步骤:1)每100 mL去离子水或蒸馏水中加入1‑‑2g脱脂奶粉和1‑2g琼脂混合均匀配制成上层固化物;每100 mL去离子水或蒸馏水中加入1‑‑2g琼脂混合均匀配制成下层固化物;将上述上层固化底物和下层固化物分别装入容器密封,116℃灭菌15min,45℃保温,以防止底物固化; 2 )在一密闭容器底部事先垂直放置好可以形成孔洞的物体,该物体高度需大于0.3‑0.5 cm;孔洞容积为0.1~0.5mL;孔洞高度为0.3‑0.5 cm,是两层固化底物的厚度;孔洞间隔距离不小于1.5cm;密封,116℃灭菌15min;3)将步骤1中灭菌后的下层固化底物及上层固化底物倒入步骤2所述的密闭容器中:先倒入下层琼脂固化物,待下层固化物凝固之后倒入上层固化底物;所述倒入的下层固化物及上层固化底物的厚度相等,均为0.15~0.25cm,下层固化物的目的是增加孔洞容积;待两层固化物凝固后,用灭菌的镊子将用于形成孔洞的物体夹出,此时固化底物上会留有孔洞,以滴加样品使用;4 )将待测啤酒样品滴加入步骤3形成的孔洞中,密封容器,以防止水分蒸发、避免杂菌污染;5)将上述密封容器于27~37℃温度环境中孵育24~168h后取出,观察孔洞表面周围是否形成透明圈,若存在,则说明样品中含有蛋白酶;若没有,则说明样品中不含有蛋白酶;所述步骤3‑‑4需在无菌环境下操作;所述脱脂奶粉中蛋白质含量为50%~60%。 |