轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明涉及一种轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)采集轮叶黑藻茎段；(2)脱毒：将轮叶黑藻茎段进行消毒；(3)诱导培养：将轮叶黑藻茎段接种入诱导培养基上进行诱导培养，诱导培养出轮叶黑藻不定芽；(4)增殖培养：将轮叶黑藻不定芽接种在增殖培养基上进行增殖培养，进一步培养出大量的不定芽；(5)生根培养：将经增殖培养后得到的不定芽接种在生根培养基上进行生根培养；(6)将经生根培养后的带有根须的轮叶黑藻的培养瓶打开，放置于室内自然条件下进行炼苗，取出培养瓶内的组培苗，洗净，转至池塘中养殖。本发明为生态修复净化水体、渔业养殖、有机肥堆制等提供需要，做到全年、可持续、大规模供应轮叶黑藻组培苗。

主权项

一种轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法，其特征是，包括以下步骤：（1）于春季从野外湖泊中采集轮叶黑藻茎段，在自来水中冲洗2~4h后，除去杂质，放入无菌水中浸泡20~30min，再经无菌水冲洗3~5次，备用；（2）脱毒：将经步骤（1）处理过的轮叶黑藻茎段用浓度70%~75%的酒精消毒4~8s，再用无菌水冲洗4~6次后，放入浓度为0.1%~0.15%的升汞中灭菌3~5min后用无菌水冲洗4~6次，置于无菌纸上晾干，切割成1~2cm；（3）诱导培养：将切割后的轮叶黑藻茎段接种入诱导培养基上进行诱导培养25~30天，诱导培养出轮叶黑藻不定芽；培养室温度为25±2℃，光照强度为1200~1600Lux，光照周期为10~12h /d；（4）增殖培养：将轮叶黑藻不定芽切成1~2cm后，接种在增殖培养基上进行增殖培养25~35d，进一步培养出大量的不定芽；培养室温度为25±2℃，光照强度为1200~1600Lux，光照周期为10~12h /d；（5）生根培养：将经增殖培养后得到的不定芽切割成1~2cm，并带有2~3个小节段，接种在生根培养基上进行生根培养30~35d；培养室温度为25±2℃，光照强度为1200~1600Lux，光照周期为10~12h /d；（6）将经生根培养后的带有根须的轮叶黑藻的培养瓶打开，放置于室内自然条件下2~3d进行炼苗，炼苗温度在10~30℃，室内光照强度为1000~1200 Lux，取出培养瓶内的组培苗，洗净，转至自然条件下的池塘中养殖；所述诱导培养基为1/2MS培养基中加入0.1~0.3mg/L 的6‑BA或0.1~0.3mg/L 的NAA；所述增殖培养基为MS培养基加入0.5~1.0mg/L 的6‑BA与0.1~0.3mg/L 的NAA；所述生根培养基为MS培养基加入0.2~0.4mg/L 的6‑BA、0.1~0.3mg/L 的NAA和0.2~0.4mg/L 的IBA；所述MS培养基的成分由大量元素、微量元素、有机成分、铁盐、蔗糖和琼脂组成。