长链无模板DNA的高通量高保真自动化合成方法

摘要

长链无模板DNA的高通量高保真自动化合成方法。本发明提供了一种以自动移液工作站为核心的方法，可以在极少的人工干预下进行对乃至真核基因组(>10000,000basepair)的DNA序列进行自动化合成。由于该自动化合成中心仅需要最小化的人工干预，整个合成过程在无菌条件下进行，极大程度的减少了对样品的污染。其次自动化移液站可以非常精准的提取和释放定量的试剂，避免了人工操作的引入的误差，使得成功率大大提高。该自动化合成中心的操作速度大大超过了人工操作，而且可以无休全速工作，使得生产效率上升，同时通过减少误差减少人力和时间，达到了大片段DNA的高通量高保真自动化合成和合成成本的大幅下降。

主权项

长链无模板DNA的高通量高保真自动化合成方法，包括以下步骤： （1）用户指定需要合成的目的DNA序列； （2）分割为生物组件：对要合成的DNA序列进行分析计算，将长链DNA分隔成多个750碱基大小的生物组件，相邻两个生物组件之间有一定的重叠序列；（3）分割为单链核苷酸：将每个生物组件分隔成16－20个有一定重叠的长度为60－79bp的单链核苷酸；（4）合成单链核苷酸：常规方法合成上述单链核苷酸；（5）合成生物组件：计算机程序最终输出机器代码用于操作自动化移液站；经过编程，该自动化移液站可以精确无误的将单链核苷酸进行混合，并添加定量的反应酶及各种试剂，而后进行聚合酶链反应，质粒转座和后续的质量监控步骤；通过进行多次聚合酶链反应将这些核苷酸精确构成双链的生物组件，并且在每次聚合酶链反应后进行长度检测；在生物组件合成之后，将进行DNA分析保证每个碱基都是正确的；（6）最后挑选正确的生物组件，最终拼装成目的DNA。