内切壳聚糖酶载体的制备方法和内切壳聚糖酶的固定方法

摘要

本发明涉及内切壳聚糖酶载体的制备方法和内切壳聚糖酶的固定方法。经过NaOH、冰乙酸、对甲苯磺酰氯、吡啶处理得到棉质的纤维条可以作为内切壳聚糖酶载体。采用本发明的技术方案有下列优点：固化酶便于与反应后的液体体系中的产物分离，而且固化酶取出后可反复使用。与游离酶相比，酶固定化后，极易与底物、产物分开，可以在较长时间内进行装柱连续反应，产物壳寡糖溶液中没有酶的残留，提高了壳寡糖的质量；酶有较高的稳定性、较长的操作寿命和保存期，且酶可重复使用，成本显著降低。

主权项

内切壳聚糖酶的固定方法，其特征在于：去离子水洗涤载体3次，以250U/g载体比例，将0.2mol/L PH6.5 NaH2PO4‑Na2HPO4缓冲液稀释的内切壳聚糖酶加入载体中，于250r/min的恒温水浴振荡器中固定12h，去离子水洗涤，固定化酶4℃缓冲液中保存；其中载体的制备方法如下：棉质的纤维条浸入200ml质量百分浓度为15％的NaOH溶液中处理10min后，用蒸馏水洗涤数次，再在质量百分浓度为10％的冰乙酸中浸泡30min，最后用去离子水洗至中性；按15ml吡啶/g棉质的纤维条的比例加入吡啶，在25℃，250r/min恒温水浴振荡器中作用0.5h；按15g对甲苯磺酰氯/g棉质的纤维条的比例，向吡啶处理过的棉质的纤维条中加入用丙酮溶解的对甲苯磺酰氯，每1g对甲苯磺酰氯采用2ml丙酮溶解；在25℃，250r/min恒温水浴振荡器中作用4h，再加丙酮清洗，再用0.05mol/L HCl清洗，取出的棉质的纤维条可以作为内切壳聚糖酶载体。