一种微量终点显色鲎试验方法

摘要

本发明涉及细菌内毒素检测技术，特别是一种微量终点显色鲎试验方法。该方法使用96孔微孔酶标板作为反应容器及光度测定容器，使用微量的鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate，TAL或Limulus Amebocyte Lysate，LAL)作终点显色法鲎试验。本发明的微量终点显色鲎试验方法消耗的TAL量仅是现行鲎试验方法的10～20％，即10～20μl/T，而且实验操作更简便快捷。本发明的部分内容同样可以应用到其它光度法鲎试验，使TAL的用量减少80～90％。

主权项

一种微量终点显色鲎试验方法，其特征是该方法使用96孔塑料微孔酶标板作为反应容器及光度测定容器，使用微量的鲎试剂作终点显色法鲎试验；所述96孔塑料微孔酶标板(1)外周尺寸及各孔(2)中心位置与美国国家标准学会及生物分子筛选学会标准中的酶标板的外周尺寸及各孔中心位置相同；所述各孔(2)的直径为Φ3.0～5.0mm，孔深为7～12mm；所述使用微量的鲎试剂为TAL或LAL，其方法步骤如下，以下步骤所描述的过程是指每单个孔的试验过程：a)用水复溶冻干的显色基质，用显色基质溶液复溶冻干的鲎试剂，使复溶后的鲎试剂含有显色基质；b)取10～40μl含有显色基质的鲎试剂加入到96孔塑料微孔酶标板(1)的孔(2)中，另加入等量的样品，混匀，在温度为37℃的条件下反应5～30分钟；所述样品为水、标准内毒素或供试品；c)当反应达到预定的时间，另加入反应终止液，加入量是鲎试剂量的两倍，去终止该反应；d)把96孔塑料微孔酶标板(1)放入光度仪/酶标仪中测定吸光度值OD，对数据作回归分析并计算供试品的内毒素含量。