一种同时鉴别食品中四种肉类成分的多重PCR方法

摘要

本发明属于食品质量安全检测技术领域。具体涉及通过动物基因组DNA提取、引物设计和通用引物多重PCR方法（Universalprimers-multiplexPCR，UP-M-PCR）对食品中猪、牛、羊、鸡4种肉类成分进行同时快速检测。根据动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点，利用正向引物共用、反向引物特异的策略，应用包含5条引物的通用引物多重PCR体系实现4种肉类成分的同时快速鉴别，结果表明，以上方法具有良好的针对该四种目标肉类成分的特异性，检出限可达到皮克级，且反应体系各组分未见交叉干扰。对市场上肉制品随机抽取80份食品样检测验证鉴别方法的准确性。总之，本发明建立了特异、灵敏、实用的食品中4种常见肉类成分快速筛选的多重PCR方法。

主权项

一种同时快速鉴别食品中猪、牛、羊、鸡四种肉类成分的通用引物多重PCR方法，其特征是由以下步骤构成：  （1）使用DNeasy 组织细胞DNA提取试剂盒提取基因组总DNA；  （2）基于动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点，采用正向引物共用、反向特异性引物的策略设计5条通用引物多重PCR引物，建立并优化多重PCR反应体系，通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4种肉类的快速同时鉴别，多重PCR的反应体系为：PCR反应50μL体系：反应缓冲液（10×）5μL，dNTP（2.5mmol/L）4μL，MgCl2（2.5mmol/L）3μL，Taq酶0.5μL，正向引物与4条反向引物（10μmol/L）各1μL，模板2μL，反应条件为94℃3min，30个循环的94℃、30s，52℃、30s，72℃、45s，72℃、7min。