三次采油专用液体黄原胶的生产方法

摘要

本发明属于微生物发酵和提取，具体的说是一种三次采油专用液体黄原胶的生产方法。包括将斜面菌种经扩大培养制成种子液、将种子液接入以经过滤膜过滤的去离子水配制、且含碳源、氮源及营养元素的发酵培养基中进行通气发酵、以及经预处理加热灭菌，膜处理等后提取步骤，本发明解决了现有技术存在的在三次采油时不能透过滤膜，堵塞地层，降低了三次采油的采收率等问题。具有通过本发明生产的液体黄原胶在使用浓度条件下，滤过比小于1.5，在三次采油时可透过5微米滤膜，不堵塞地层，可提高三次采油的采收率达25％以上；另外，它还具有工艺简单、制造成本低廉等优点。

主权项

三次采油专用液体黄原胶的生产方法，其特征在于该方法包括如下工艺步骤：A、将斜面菌种经扩大培养制成种子液；所述的A步骤中斜面菌种经扩大培养制成种子液包括将斜面菌种制成摇瓶种子、将摇瓶种子制成一级种子、将一级种子制成二级种子，其中摇瓶种子的制备的工艺条件如下：摇瓶种子培养液的包括如下质量份的组分：葡萄糖1.0％‑2.0％    酵母膏0.1％‑0.3％    鱼胶原蛋白0.2％‑0.4％氯化钠0.1％‑0.2％    牛骨蛋白胨0.2％‑0.4％摇瓶种子培养液的灭菌条件：蒸汽压力0.1‑0.14Mpa、温度121‑125℃、保持30‑35分钟；摇瓶种子的制备过程为：将接种针挑取一环斜面菌种中的原菌接入灭菌后的摇瓶种子培养液中，培养温度为28‑34℃、转速为160‑200转/分钟、培养周期为20‑24小时进行振荡培养；将摇瓶种子制成一级种子的工艺条件如下：一级种子培养液包括如下质量份的组分：葡萄糖1％‑1.5％         酵母膏0.2％‑0.3％   牛骨蛋白胨0.2％‑0.3％磷酸氢二钾0.1％‑0.15％  NaCl0.2％‑0.3％     FeSO40.05％‑0.08％磷酸镁0.1％‑0.15％      有机硅消泡剂0.1‑0.3％一级种子培养液的灭菌条件：温度121‑125℃，蒸汽压力0.1‑0.14MPa，时间30‑35分钟；一级种子培养液采用经过滤膜过滤的去离子水进行配制；一级种子的制备过程为：将摇瓶种子按照接种量为2％‑5％接入灭菌后的一级种子培养液中，培养温度为28‑34℃、培养周期为20‑24小时，风量0.2‑0.6vvm，当OD值大于5时将一级种子接入二级种子培养液；将一级种子制成二级种子的工艺条件如下：二级种子培养液包括如下质量份的组分：葡萄糖0.5％‑2％    硝酸铵0.1％‑0.3％    氯化铵0.2％‑0.3％磷酸氢二钾0.15％‑0.3％   NaCl0.5％‑0.9％    FeSO40.05％‑0.08％磷酸镁0.1％‑0.2％        有机硅消泡剂0.05％‑0.3％二级种子液的灭菌条件为：温度121‑125℃，压力0.1‑0.14MPa，时间30‑35分钟；二级种子培养液采用经过滤膜过滤的去离子水进行配制；二级种子的制备过程为：将一级种子按照接种量为10％‑20％接入灭菌后的二级种子培养液中，培养温度为28‑34℃、培养周期为10‑15小时、当OD值大于6时将二级种子接入发酵培养基；B、将A步骤中制备的种子液按种子液：发酵培养基为8％‑15％的接种量接入发酵培养基进行发酵，其中发酵培养基包括下列质量份的组分：葡萄糖3.5％‑4.2％     柠檬酸0.1％‑0.2％    氢氧化镁0.15％‑0.2％硝酸铵0.2％‑0.3％     硝酸钠0.1％‑0.2％    磷酸氢二钾0.15％‑0.3％NaCl 0.05％‑1％       FeSO4 0.05％‑0.09％  硫酸镁0.1％‑0.3％硫酸锌0.025％‑0.04％  有机硅消泡剂0.05％‑0.3％发酵培养基的配制方法为：先将柠檬酸加经过滤膜过滤的去离子水至完全溶解，再将发酵培养基中的其他各组分按氢氧化镁、硝酸铵、硝酸钠、磷酸氢二钾、NaCl、FeSO4、硫酸镁、硫酸锌的顺序依次加入，溶解过程中每种组分完全溶解后再加入下一种组分，PH值为6.5‑7.0；发酵过程中的工艺条件为：10小时内：温度28‑34℃，压力0.03‑0.05MPa，风量0.3‑0.4vvm，pH值6.7‑6.9；10‑20小时：温度28‑34℃，压力0.03‑0.05MPa，风量0.4‑0.5vvm，pH值6.5‑6.7；20‑30小时：温度28‑34℃，压力0.03‑0.05MPa，风量0.5‑0.6vvm，pH值6.5‑6.7；30‑40小时：温度30‑34℃，压力0.03‑0.05MPa，风量0.5‑0.6vvm，pH值6.5‑6.7；40‑60小时：温度30‑34℃，压力0.03‑0.05MPa，风量0.5‑0.6vvm，40‑45小时补入葡萄糖；控制葡萄糖浓度为2％‑3％；60‑70小时温度30‑34℃，压力0.03‑0.05MPa，风量0.5‑0.8vvm，pH值6.8‑7.0；斜面菌种选用野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)；C、将发酵完成后的发酵液经将成熟的发酵液经预处理加热灭菌，膜处理即得三次采油专用液体黄原胶；所述的C步骤中的预处理加热灭菌的过程及工艺条件为：发酵液加入酸性蛋白酶处理，用量为500‑1000ml发酵液用20‑30个蛋白酶单位，45‑50℃维持6‑8小时，然后升温80‑90℃灭酶，维持0.5‑1小时，灭酶后的发酵液过胶体磨，加3000‑5000ppm浓度为30％‑37％甲醛，搅拌均匀；膜处理过程及工艺条件为：处理后的发酵液经膜过滤进行提纯浓缩，使发酵液的浓度达6‑10％。