一种运载荷载细胞因子的双调控溶瘤腺病毒的新型CIK细胞

摘要

本发明公开了一种运载荷载IL-2的双调控溶瘤腺病毒的新型CIK细胞，属新型CIK细胞的制备方法。该CIK细胞能够运载荷载细胞因子如IL-2的溶瘤腺病毒。该溶瘤腺病毒经过改造后，其穿梭质粒在缺失E1B55-kD的同时，利用hTERT启动子取代E1A启动子，达到双重调控病毒在肿瘤细胞中的选择性增殖。然后将此穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pBHG-fiber5/35重组，使完整的溶瘤病毒外壳具有嵌合型纤毛蛋白结构，以提高病毒感染CIK细胞的能力。该CIK细胞进入体内杀伤肿瘤细胞后，释放出的溶瘤腺病毒能发挥二次杀伤肿瘤细胞作用，同时所分泌的细胞因子IL-2能增强CIK细胞的抗肿瘤能力，发挥“细胞-病毒-基因”的三重协同抗肿瘤作用。该CIK细胞同时减少了全身应用细胞因子和溶瘤腺病毒的副作用。

主权项

一种运载荷载IL‑2的双调控溶瘤腺病毒的CIK细胞，其特征在于：以CIK细胞作为病毒载体，所运载的病毒是经过改造的荷载IL‑2的双调控溶瘤腺病毒TERT‑ZD55/F35‑IL‑2，TERT‑ZD55/F35‑IL‑2的改造的方法为：①首先利用PCR技术得到hTERT启动子的基因片段，然后克隆进E1B‑55kD蛋白缺失的溶瘤腺病毒穿梭质粒pZD55中，替换E1A蛋白基因的启动子，将其命名为pTERT‑ZD55；②克隆得到的IL‑2 cDNA并将其克隆进pTERT‑ZD55中，将其命名为穿梭质粒pTERT‑ZD55‑IL‑2；③利用Ad35纤毛蛋白的knob和shaft替换Ad5纤毛蛋白的knob和shaft，构建病毒重组的骨架质粒，命名为pBHG‑fiber5/35；④pTERT‑ZD55‑IL‑2与pBHG‑fiber5/35通过Effectene共转染至293细胞，经过病毒空斑纯化，鉴定得到重组正确的病毒，即具有嵌合型纤毛蛋白、荷载IL‑2的双调控溶瘤腺病毒TERT‑ZD55/F35‑IL‑2。