核苷酸链的修饰方法

摘要

在将作为修饰对象的核苷酸链和具有与构成所述核苷酸链的碱基不同的特定碱基的核苷酸加入到缓冲液而得的混合液中，使对所述核苷酸向所述核苷酸链的3′末端的附加进行催化的酶、特异地作用于所述核苷酸的分解酶和修饰所述核苷酸链的所需的修饰物质共存，在将所述核苷酸附加到所述核苷酸链的3′末端的同时，分解所附加的核苷酸的序列而在所述核苷酸链的3′末端形成对于所述修饰物质具有结合能力的官能团，用所述修饰物质直接对形成有所述官能团的核苷酸链的3′末端进行修饰。在混合液中使3步反应连续地进行，可以实现操作的简便化、短时间化。

主权项

核苷酸链的修饰方法，其特征在于，在将作为修饰对象的核苷酸链、具有特定碱基的核苷酸、将催化附加反应的酶的反应活性温和的缓冲剂成分和将催化附加反应的酶活化的活化因子进行混合而得的反应混合液中，使末端脱氧核苷酸转移酶、特异地作用于所述核苷酸的分解酶和修饰所述核苷酸链的具有‑NH2的修饰物质共存，在将所述核苷酸附加到所述核苷酸链的3′末端的同时，分解所附加的核苷酸的序列而在所述核苷酸链的3′末端形成对于所述修饰物质具有结合能力的官能团，用所述修饰物质直接对形成有所述官能团的核苷酸链的3′末端进行修饰；所述特定碱基是腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶经烷基化、脱氨基化、卤化、羟基化或氧化而得的突变碱基；所述官能团为醛基；所述的活化因子是锰离子或镁离子；所述的特异地作用于所述核苷酸的分解酶为DNA糖苷酶或DNA修复酶。