从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取喜树碱和9-羟甲基喜树碱的方法

摘要

本发明涉及药物提取领域，尤其是从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取喜树碱和9-羟甲基喜树碱两种植物抗癌药物的方法。本发明提供一种先利用微生物发酵再进行高纯度喜树碱和9-羟甲基喜树碱提取的方法。该方法能够极大提高马比木嫩叶和嫩枝中的喜树碱含量，从而提高喜树碱的得率。克服了传统喜树碱提取量低的缺陷，降低了药物成本，节省土地资源。

主权项

一种从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取喜树碱的方法，其步骤包括：预处理：选取新鲜的臭马比木嫩叶和嫩枝，干燥后研磨成粉末；发酵：按酶料比1.5：1(w/w)加入发酵液，发酵1~3天；发酵温度为20~37℃，所述发酵液为安琪高糖干酵母或发利干酵母，其浓度为1~11‰(w/w)；提取：在发酵产物中按0.5~3：1(w/w)的比例加入提取液，加热提取；所述提取液为浓度为10~90%的乙醇溶液；所述加热提取的温度控制在40~75℃之间；过滤：滤取上清液，即得提取液；（5）、浓缩：在上述提取液中加入0.5~10%（W/V）的二氧化硫和硫酸亚铁，浓缩，得浓缩物；（6）、萃取：在浓缩物中加入萃取剂对浓缩物进行萃取，并回收萃取剂，得到萃取浓缩物，所述萃取剂为石油醚或二氯甲烷；（7）、纯化：在萃取浓缩物中加入10%~90%的丙酮溶液，先采用硅胶柱层析，初步结晶度达到70%左右；再进行低压柱层柱，结晶纯度达到80%左右；再采用FLASH中压柱层析，收集洗脱液，其结晶纯度达到95%左右；最后进行重结晶，得到纯度为99%成品。