河蚬糖胺聚糖及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种河蚬糖胺聚糖的制备方法，包括下列步骤：(1)河蚬预处理；(2)河蚬脱脂；(3)超声波处理；(4)木瓜蛋白酶酶解；(5)TCA沉淀；(6)溶解；(7)离心取上清后，氯化十六烷基吡啶(CPC)沉淀多糖；(8)盐溶去除CPC；(9)乙醇沉淀，干燥；(10)、经截留分子量7000Da的透析袋透析后冷冻干燥，得冻干后的河蚬糖胺聚糖粗品。上述河蚬糖胺聚糖粗品经DEAE-Cellulose阴离子交换柱层析，能近一步纯化河蚬糖胺聚糖粗品，从而得河蚬糖胺聚糖的精糖。本发明方法制备而得的河蚬糖胺聚糖能用于抑制胃癌细胞或卵巢癌细胞的生长活性。

主权项

河蚬糖胺聚糖的制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、河蚬预处理：将新鲜的河蚬冷冻干燥后粉碎，得河蚬粉末；2)、河蚬脱脂：将河蚬粉末于2～6℃的丙酮中浸泡20～28h，室温抽滤至干燥，得脱脂后河蚬粉末；3)、超声波处理：向脱脂后河蚬粉末中加入醋酸‑醋酸钠缓冲液(0.1M，pH 6.0)，于190～475W的超声功率下超声10～30min，得超声处理液；所述河蚬粉末与醋酸‑醋酸钠缓冲液的料液比为：1g/25～35ml；4)、木瓜蛋白酶酶解：向超声处理液中加入乙二胺四乙酸和L‑半胱氨酸，从而使乙二胺四乙酸和L‑半胱氨酸的终浓度均分别为4.8～5.2mM；混匀后升温至55～65℃，再加入木瓜蛋白酶保温水解30～110min，所述木瓜蛋白酶是河蚬粉末质量的1.4～1.6％；最后再加入用以沉淀蛋白的三氯乙酸至终浓度50g/L；于3～5℃静置20～40min；5)、沉淀：将步骤4)所得的酶解液离心，收集上清，向上清中加2.8～3.2体积倍的质量浓度为5％的乙酸钾乙醇溶液，于3～5℃静置10～14小时；6)、溶解：将步骤5)所得的溶液离心，所得的沉淀先用无水乙醇洗涤，烘干至恒重后，得干燥后沉淀；在干燥后沉淀中加入摩尔浓度为0.2M的NaCl溶液，所述干燥后沉淀与NaCl溶液的料液比为1g/30～50ml；再次离心，收集上清；7)、CPC沉淀：向步骤6)所得的上清中加入质量浓度为5％的氯化十六烷基吡啶溶液，离心收集沉淀；所述氯化十六烷基吡啶溶液与上述步骤6)中的干燥后沉淀的料液比为1g/0.4～0.6ml；8)、盐溶：步骤7)所得的沉淀用2.5M的NaCl溶液溶解，所述NaCl溶液与上述步骤6)中的干燥后沉淀的料液比为1g/8～12ml；9)、醇沉：向步骤8)所得的溶液中加入4.5～5.5体积倍的无水乙醇，直至沉淀出现后离心，收集 沉淀；10)、透析：将步骤9)所得的沉淀加水溶解后，经截留分子量7000Da的透析袋透析后冷冻干燥，得冻干后的河蚬糖胺聚糖粗品。