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一种生脉液体制剂类过敏反应的检测方法，包括如下操作步骤：(1)嗜碱性粒细胞的制备1)Percoll混悬液的配制：取Percoll 90ml，加入HBSS 9ml，0.25mol/l的HEPES 1ml，1mol/l的HCl 0.4ml调节至pH7.4；2)制备Percoll密度梯度管：密度为1.088，Percoll/HBSS为23∶10混悬液取4ml置于密度梯度管底层，密度为1.079，Percoll/HBSS为27∶15.9混悬液取4ml置于密度梯度管第二层，密度为1.070，Percoll/HBSS为24∶20混悬液取3ml置于密度梯度管最上层；3)用0.1mol/l EDTA，pH 7.7抗凝新鲜血，将新鲜的抗凝血按等体积加于Percoll密度梯度分层液上，室温下1200rpm离心25min；4)将每一细胞层分别吸出各放于1支试管内，加Hanks液在4度下洗涤3次，每次1200rpm，离心10min弃去上清；5)分别得到的各层细胞涂片，固定后用Wright‑Giemsa染液染色，在显微镜下检查嗜碱性粒细胞，调整细胞浓度，涂片染色计数；(2)嗜碱性粒细胞检测生脉液体制剂中类过敏反应的测定1)生脉液体制剂稀释液与嗜碱性粒细胞共同孵育；2)于1、3、6、12、24小时吸取嗜碱性粒细胞，4℃，1000rpm离心5min，细胞沉淀用PBS洗涤两次，再将细胞与PE标记的抗人CD203c抗体室温下共同孵育15min，用流式细胞仪测定嗜碱性粒细胞荧光强度变化，显示CD203c表达量的多少，判断嗜碱性粒细胞活化情况。 |
