用于纯化富集真皮内多向分化潜能细胞的标志膜蛋白

摘要

本发明涉及用于纯化富集真皮内多向分化潜能细胞的标志膜蛋白，其采用以下步骤获得：真皮来源细胞经体外培养、扩增，并经稀释和96孔板培养，获取若干单克隆细胞；对上述所得的单克隆细胞进行成脂肪、成骨及成神经体外诱导，并鉴定其分化能力；分别对双向克隆细胞和三向克隆细胞分离提纯，获得相应的膜蛋白组分；通过双向电泳分析，找出三向克隆和双向克隆的差异蛋白点；进行LTQ质谱分析，获得匹配的蛋白质；通过Western-Blot检测，找出标志膜蛋白。本发明还涉及所述的标志膜蛋白的用途，经上述方法初步筛选出的随着分化能力的变化而出现较明显上调或下调的标志膜蛋白，可用于具有多向分化潜能细胞的分选纯化。

主权项

人的真皮内多向分化潜能细胞的标志膜蛋白的筛选方法，其特征在于，该方法包含以下具体步骤：步骤1，人的真皮来源细胞经体外培养、扩增，并经稀释和96孔板培养，获取若干单克隆细胞；步骤2，对上述步骤1得到的单克隆细胞进行多向诱导，并鉴定其分化能力；步骤3，以膜蛋白提取液分别提取双向克隆细胞和三向克隆细胞的膜蛋白，获得相应的膜蛋白组分；步骤4，上述步骤3获得的膜蛋白，通过双向电泳分析，找出三向克隆和双向克隆的差异蛋白点；步骤5，通过LTQ质谱分析，获得与上述的差异蛋白点相匹配的蛋白质结果；步骤6，通过Western‑Blot检测上述匹配的蛋白质，找出呈现阳性的标志膜蛋白；其中，步骤6所找出的标志膜蛋白是指：ANXA2膜联蛋白A2、PHB阻抑素及PDIA3人蛋白二硫化物异构酶A3。