以Nisin作为天然抗性筛选标记的乳酸菌表达质粒的构建

摘要

本发明涉及一种以Nisin作为天然抗性筛选标记的乳酸菌表达质粒的构建，属于生物技术领域。本发明的构建方法是用来自乳酸菌载体pNZ9530的Nisin元件替换乳酸菌质粒pMG36e红霉素抗性基因作为选择标记，通过PCR扩增、基因克隆、合成多克隆位点、加入嗜酸乳杆菌信号肽、消除抗性基因来实现Nisin食品级表达/分泌型载体的构建。本发明是以食品级选择标记取代了抗生素抗性标记载体，所构建的食品级表达/分泌载体为食品级活载体，对人体和环境安全系数高，可广泛应用于疫苗、食品、药品的应用研究，本发明构建方法可实现外源抗原基因的长期稳定表达，获得长期稳定表达目的抗原蛋白，且方法简单、可操作性强。

主权项

一种以Nisin作为天然抗性筛选标记的乳酸菌表达质粒的构建，其特征在于：是用来自乳酸菌载体pNZ9530的Nisin元件替换乳酸菌质粒pMG36e红霉素抗性基因作为选择标记，通过PCR扩增、基因克隆、合成多克隆位点MCS、加入嗜酸乳杆菌信号肽Ins、消除抗性基因Emr来实现Nisin食品级表达/分泌型载体PMN‑5的构建。