重组人硫氧还蛋白的制备方法

摘要

本发明属于医药生物技术领域，涉及一种重组人硫氧还蛋白的制备方法。通过该制备方法可获得纯度达95％以上的目的蛋白质，所获得的人硫氧还蛋白具有生物学活性。本发明还构建人重组硫氧还蛋白菌种库，测定了种子库的传代稳定性；采用免疫印迹法证明该重组人硫氧还蛋白可与鼠抗人硫氧还蛋白抗血清特异性结合；还通过胰岛素二硫键还原法测定该蛋白质活性。结果表明，纯化出的重组人硫氧还蛋白具有胰岛素二硫键还原酶活性，且效果明显。本发明方法仅通过两步离子交换作用层析，就完成了目的蛋白的分离纯化，步骤简单、快速、成本低，为人硫氧还蛋白的进一步研究和广泛应用奠定基础。

主权项

一种重组人硫氧还蛋白(rhTrx)的制备方法，其特征在于，该制备方法包含以下步骤：1)诱导培养重组菌，离心获得菌体；2)裂菌，离心，收集上清；3)上清上样于阴离子交换层析柱，收集目的蛋白所在洗脱峰，得到一次纯化产物；4)将得到的一次纯化产物上样于阳离子交换层析柱，收集目的蛋白所在洗脱峰，得到重组人硫氧还蛋白；最终获得纯度达95％以上的重组人硫氧还蛋白。