利用SCAR标记鉴定甘蔗抗黑穗病性方法

摘要

一种利用SCAR标记鉴定甘蔗抗黑穗病性的方法，包括基因组DNA的提取、SCAR-PCR标记的检测体系建立和SCAR-PCR产物的检测。本发明的利用SCAR标记鉴定甘蔗抗黑穗病性的方法，具有灵敏度高，所需要的DNA用量少的特点；与常规的人工接种田间抗性鉴定相比，具有操作简便、检测时间短、准确性高、容易判断、重复性好和不受环境条件影响等优点。为甘蔗种质资源的评价和新品种的审定工作，提供了简便有效的抗黑穗病性鉴定体系，对科研和生产具有重要的意义。

主权项

一种利用SCAR标记鉴定甘蔗抗黑穗病性的方法，包括基因组DNA的提取、SCAR‑PCR标记的检测体系建立和SCAR‑PCR产物的检测，其特征在于：SCAR‑PCR标记的检测：使用的检测引物是甘蔗SCAR‑F和SCAR‑R，其中SCAR‑F是5′‑CTTTGTTTCCCGTAGTGTCTTGT‑3′，SCAR‑R是5'‑ATAGCCTGCCTTCTCTCCTTT‑3'；   （2）SCAR‑PCR标记的检测建立：SCAR‑PCR扩增体系为总体积25 μl，内含2.5 μl 10×PCR缓冲液，2.5 μl 25 mmol/L MgCl2，0.5 μl 10 mmol/L dNTP，10 mmol/L 的检测引物SCAR‑F和SCAR‑R各1.0 μl，1.25 U Taq DNA Polymerase，20‑50 ng基因组DNA，ddH2O补足到25 μl； SCAR‑PCR扩增程序如下：94 ℃ 4 min；94 ℃ 1 min，58 ℃ 1 min，72 ℃ 2 min，30个循环；72 ℃10 min；所述10×PCR缓冲液组成成分为100 mmol/L pH8.5 Tris‑HCl，500 mmol/L KCl和15 mmol/L MgCl2；    （3）SCAR‑PCR产物的检测：电泳检测的SCAR‑PCR扩增图谱中，在分子量为331 bp的位置出现DNA条带，为甘蔗感黑穗病的标志；在分子量为331 bp的位置未出现DNA条带，为甘蔗抗黑穗病标志。