一种气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR快速检测试剂盒和检测方法

摘要

一种气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR快速检测试剂盒，包括：(1)DNA提取试剂：TE缓冲液，5-15mM Tris，0.5-1.5mM EDTA；10-20mg/mL溶菌酶水溶液；10-20mg/mL蛋白酶K水溶液；Tris饱和酚；2-5mol/L乙酸钠水溶液；95％乙醇；(2)PCR反应试剂管：PCR反应液49μL，包括10×PCR反应缓冲液5μL，dNTPs(10uM/L)0.5μL，Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.5μL，特异性寡核苷酸引物引物1、引物2、引物3、引物4，用灭菌去离子水定容。一种气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR快速检测方法：(1)DNA抽提，(2)PCR扩增反应，(3)被检测样品目的PCR扩增产物和电泳检验。本发明适用于水产生物致病菌的快速检测。

主权项

一种气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR快速检测试剂盒，其特征是它包括：(1)DNA提取试剂：成分为5‑15mM Tris、0.5‑1.5mM EDTA的pH 8.0的TE缓冲液；溶菌酶水溶液，浓度10‑20mg/mL，pH8.0；蛋白酶K水溶液，浓度10‑20mg/mL，pH8.0；Tris饱和酚，pH8.0；乙酸钠水溶液，浓度2‑5mol/L；乙醇，浓度95％；(2)PCR反应试剂管：PCR反应液，49μL，包括10×PCR反应缓冲液5μL，浓度为10μM的dNTPs 0.5μL；浓度为5U/μL的Taq DNA聚合酶0.5μL；特异性寡核苷酸引物引物1、引物2、引物3、引物4，用灭菌去离子水定容，所述引物1、引物2为所述气单胞菌GCAT基因保守区的引物，引物3、引物4为所述嗜水气单胞菌16S rDNA保守区的引物，其中，引物1：5’‑TCCCAAGTATCAGGTCATCAACA‑3’，引物2：5’‑GAGGCAAACGGCTTCCACA‑3’，引物3：5’‑AGGTTGATGCCTAATACGTA‑3’，引物4：5’‑CGTGCTGGCAACAAAGGACAG‑3’，其中引物1、引物2浓度为200nmol/L，引物3、引物4浓度为40nmol/L。