一种鉴定白蚁巢群生殖模式的微卫星DNA方法

摘要

本发明涉及一种鉴定白蚁巢群生殖模式的微卫星DNA方法，在野外采集同一巢群的20头以上白蚁样品，提取样品基因组DNA，稀释。在GenBank上查找与白蚁生殖模式相关的微卫星位点，利用软件Primer Premier 5.0在微卫星重复序列的侧翼设计引物，选用微卫星引物对白蚁样品DNA进行PCR扩增后在自动分析仪上进行电泳，用SAGAGT软件测定电泳图中每个条带对应样品的基因型。基于“孟德尔定律”对白蚁样品的观测基因型频率与期望基因型频率进行卡方检验，判定白蚁巢群的生殖模式。采用本发明对长沙10个黑胸散白蚁巢群生殖模式的微卫星DNA鉴定表明：简单巢群7个、扩大巢群2个和混合巢群1个。本发明操作简便，结果可靠，可准确判断白蚁巢群的生殖模式，对制定防治白蚁策略有重要参考价值。

主权项

一种鉴定白蚁巢群生殖模式的微卫星DNA方法，其特征在于具体步骤如下：1)在野外采集同一巢群，20头以上的白蚁样品，将样品放入装有95％酒精的样品管中，置于‑20℃冰箱中备用，采样过程中，测定每个采样点的经度、纬度和海拔高度；2)提取白蚁样品的基因组DNA，再用ND‑2000微量紫外/可见分光光度计测定样品DNA浓度，并统一稀释成10‑20ng/μl待用；3)在GenBank上查找与白蚁生殖模式相关的微卫星位点；4)利用软件Primer Premier 5.0在微卫星重复序列的侧翼设计引物，选用微卫星位点Rf24‑2、Rf21‑1、Rf6‑1、Rs10和RS68的微卫星引物对白蚁样品DNA进行PCR扩增，PCR扩增反应在PTC‑200PCR仪上进行；用6.5％聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增产物进行分离，选用分子标准为50‑350bp IRDye800TM standard，电泳在LI‑COR4300DNA自动分析仪上进行，再使用SAGAGT软件测定电泳图中每个条带对应样品的基因型；5)基于“孟德尔定律”对白蚁样品的观测基因型频率与期望基因型频率进行卡方检验，再判定该白蚁巢群的生殖模式：①简单巢群的基因型频率观测值与“孟德尔”简单巢群的基因型频率预期值没有显著差异时为“简单巢群”，②扩大巢群的观测基因型种类数与“孟德尔”简单巢群的预期基因型种类数不一致，或者经X2检验后工蚁的基因型频率观测值与“孟德尔”简单巢群的基因型频率预期值有显著差异，且每一位点的等位基因数都小于5时为“扩大巢群”，③混合巢群的白蚁样品在某些微卫星位点上有5个以上的等位基因时为“混合巢群”。