一种制备带有突出末端的双链DNA分子的方法

摘要

本发明提供了一种制备带有突出末端的双链DNA分子的方法。本方法利用带特殊标记的引物，通过带特殊标记的引物与不带标记的引物的不同组合，分别在模板DNA上扩增获得不同长度的DNA片段，这两种DNA分子通过变性和退火后，由不带标记的DNA链组成带有突出端的DNA分子，而带有标记的非目标DNA分子可以用与该标记结合的介质去除。利用本发明的方法可以产生通常用限制性内切酶方法不能产生的粘性末端，该粘性末端可以是5’突出，也可以是3’突出，突出的长度可以是任意多个，对模板DNA的序列、长度以及突出段的序列均无特殊要求。该方法操作简便，适合小量或大量生产。

主权项

一种制备带有突出末端的双链DNA分子的方法，包括下列步骤：1)根据模板以及对应目标DNA分子的序列，分别设计带有标记的正向引物、不带标记的正向引物、带有标记的反向引物及不带标记的反向引物；2)将带有标记的引物与不带标记的引物交叉配对，分别PCR扩增模板获得两组扩增产物；3)将步骤2获得的两组扩增产物混合，变性后退火；4)纯化分离出退火产物中不带标记的分子，该不带标记的分子即为带有突出末端的目标DNA分子。