一种利用酶切延伸增加读长的测序方法

摘要

本发明涉及基因工程领域，提供了一种利用酶切延伸增加读长的测序方法。本发明所述利用酶切延伸增加读长的测序方法，首先将第一anchor结合于原待测核酸片段的接头一上，使用连接测序法读取第一anchor延伸末端后的M个核苷酸的序列信息；然后利用内切酶识别相应的酶切识别位点将已读取序列信息的核苷酸部分或完全切除，在酶切回收的待测序片段上连接新的接头二，然后在接头二上锚定结合第二anchor，并在第二anchor延伸末端连接荧光探针，向前延伸读取核苷酸序列信息；通过重复上述操作，得到原待测核酸片段所需的核苷酸序列信息，从而利用酶切延伸进行测序的方法实现延长测序的读长且使读长不受限制的目的。

主权项

一种利用酶切延伸增加读长的测序方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：A.将第一anchor结合于原待测核酸片段的接头一上；B.在第一anchor延伸末端连接荧光探针，检测其荧光信号，更换荧光探针并重复连接和检测操作，得到第一anchor延伸末端后M个核苷酸的序列信息；C.利用内切酶将步骤B中已得到序列信息的核苷酸部分或完全切除，得到带有待测序片段的酶切产物；D.酶切产物连接接头二得新待测核酸片段，结合第二anchor于接头二上；E.在第二anchor延伸末端连接荧光探针，检测其荧光信号，更换荧光探针并重复连接和检测操作，得到第二anchr延伸末端后N个核苷酸的序列信息；F.重复步骤C至E的操作，得到原待测核酸片段中所需的核苷酸序列信息；其中，M、N均为正整数。