一种副溶血弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法

摘要

本发明公开了一种副溶血弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法。它是先提取副溶血弧菌(V.Parahaemolyticμs)的基因组DNA，以其作为模板用上述13对多基因PCR引物和一对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物，利用GenomeLab GeXP遗传分析系统对其进行检测分析。本发明针对已知13种副溶血弧菌的毒力基因设计特异性引物，通过单管反应，一次性快速高效的检测13种基因而得知检测出样品中是否含有携带毒力基因、具有潜在致病能力的副溶血弧菌，其检测覆盖面广，可大大提高副溶血弧菌致病性评价的准确性，为副溶血弧菌致病性评价提供了更为有效的检测手段，在水产养殖病害检测、流行病学调查、食品中致病菌检测、水产品进出口检测及医院感染监控等方面有着重要的应用前景。

主权项

一种副溶血弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒，包括PCR反应试剂，多基因PCR引物和GeXP多重扩增反应试剂，其特征在于，所述的多基因PCR引物包括13对多基因PCR引物和一对通用引物，具体为：为毒力基因trh设计的引物：trh‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATAGCGATTGACCTACCATCCAT‑3’trh‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGATCAACGATTGCGTTAACTGG‑3’；为毒力基因toxR‑vp设计的引物：toxR‑vp‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATATCACCAATCTGACGGAACTG‑3’toxR‑vp‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGATGTGGCTTCTGCTGTGAATC‑3’；为毒力基因vopC设计的引物：vopC‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATAACCATTGCAGCTCCATCTTT‑3’vopC‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGACCAGTGGTGCCTTATCTGGT‑3’；为毒力基因tdhI设计的引物：tdhI‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATACTTTCATGAAGCCTGCCATT‑3’tdhI‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGAGATGGAAGCTCAAAGGCAAA‑3’；为毒力基因vopL设计的引物：vopL‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATACTACCAGCGCTTTGGAGAAA‑3’vopL‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGACTACGATGTCTCGTCCCGAT‑3’；为毒力基因vopD设计的引物：vopD‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATATCTGCAAGCACGATAGCAAG‑3’vopD‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGACGTCGTTAGAAAAAGCGAGC‑3’；为毒力基因vopT设计的引物：vopT‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATATTTCTGGGTCTCGTGAGGTT‑3’vopT‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGAGGCGGAGCAATTACTGGATA‑3’；为毒力基因vopB设计的引物：vopB‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATATCGCTGCATTCATGGTTTTA‑3’vopB‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGACTGCTGGTGTTGACGAGAAA‑3’；为毒力基因gyrA‑vp设计的引物：gyrA‑vp‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATATACTGCACGTGGTAAACCGA‑3’gyrA‑vp‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGAGTTCACCGCAATTAGACCGT‑3’；为毒力基因vopP设计的引物：vopP‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATATTTGGTGATTGCACATGCTT‑3’vopP‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGAATGCAACGCAGTTATGGTGA‑3’；为毒力基因tlh设计的引物：tlh‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATAGCGATGTACTACAAAGCGCA‑3’tlh‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGAATGCGTGACATTCCAGAACA‑3’；为毒力基因HlyD设计的引物：HlyD‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATAAAAACAAGTCCTAATTTGGGGTC‑3’HlyD‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGATCATACTGAAGGCGGTGTTG‑3’；为毒力基因tdh设计的引物：tdh‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATATCCATCTGTCCCTTTTCCTG‑3’tdh‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGAAGACACCGCTGCCATTGTAT‑3’；通用引物对序列：TY‑F：5’‑AGGTGACACTATAGAATA‑3’TY‑B：5’‑GTACGACTCACTATAGGGA‑3’。