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一种肠道病毒71型人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于是通过以下步骤制备的：（1）选择符合国家献血标准的供血者血浆：以中和试验法来检测血浆中的肠道病毒71型中和抗体效价，选择中和抗体效价滴度大于等于1：8、双缩脲法测定蛋白质含量大于等于55g/L、赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶不高于25单位、乙型肝炎表面抗原阴性、梅毒阴性、HIV‑1和HIV‑2抗体阴性、HCV抗体阴性的血浆为肠道病毒71型人免疫球蛋白原料血浆，低温冰冻储存，保存期不超过2年；（2）将不少于100名供血者的原料血浆混合，得到每批次的混合原料血浆，以中和试验法测混合原料血浆中肠道病毒71型中和抗体效价滴度,选择大于等于1：64的用于制备肠道病毒71型人免疫球蛋白；（3）将选择得到的混合原料血浆在2℃下离心去除冷沉淀；（4）去除冷沉淀后的血浆,将其用生理盐水稀释得到反应液，再用pH4.0醋酸缓冲液调节反应液pH值至6.5，加95%乙醇至反应液中,使最终乙醇浓度为20%，使用冷媒控制反应液温度至‑4.5℃，板框压滤分离得沉淀；（5）将步骤（4）所得的沉淀用0℃ 0.01mol/L NaCl溶液搅拌溶解；（6）在步骤（5）所得的液体中加50%乙醇，使最终乙醇浓度为17%，以醋酸缓冲液调节反应液pH值至5.1，使用冷媒控制反应液温度至‑4.5℃，板框压滤分离除去沉淀，收集上清液； （7）将步骤（6）所得的上清液进行超滤透析四遍后上DEAE‑Sepharose‑Fast Flow弱阴离子交换层析，反应液温度为10 ℃，收集流出液；（8）将步骤（7）所得的流出液进行再超滤，用2mol/L的冰醋酸调节pH值至4.0，温度至10℃，透析8遍后浓缩至蛋白含量为7.25%、pH为3.41，得到浓缩液；（9）将步骤（8）所得的浓缩液用2mol/L的冰醋酸调pH至 3.85，加入30%麦芽糖使最终浓度在10%，补加生理盐水使蛋白含量为5.8%,得到待处理液；（10）将步骤（9）所得待处理液在24～25℃下孵放21天之后用纳米膜过滤的双病毒灭活处理；21天后将肠道病毒71型人免疫球蛋白病毒灭活处理液再返回经超滤、脱醇、脱盐、浓缩，得到肠道病毒71型人免疫球蛋白原液；(11)加入1mol/L的碳酸氢钠溶液调节原液pH值至6.8，并加入30%葡萄糖溶液至原液中葡萄糖终浓度为4%,补加生理盐水调节原液，得到配制液，配制液经0.45um滤膜过滤得半成品；分装。 |
