一种马铃薯块茎病毒的快速检测方法

摘要

一种马铃薯块茎病毒的快速检测方法，其特征在于：包括马铃薯块茎RNA的提取、RT-PCR反应和PCR产物的核酸胶体金层析试纸条检测等步骤。本发明是在优化马铃薯块茎病毒RNA提取方法的前提下，将RT-PCR技术与核酸胶体金免疫层析技术相结合，建立的适用于马铃薯块茎病毒的快速检测方法。其最大特点是：首先研制出一种RNA提取液，在马铃薯待测样本研磨后可直接进行RT-PCR检测，省去了现有方法中的RNA提取步骤，解决了由于马铃薯块茎淀粉含量高，其RNA提取困难的问题。其次，所研制的核酸胶体金层析试纸条在10min内即可完成PCR产物的检测，不需要电泳和溴化乙锭的染色，更为快速实用，且安全无污染。

主权项

一种马铃薯块茎病毒的快速检测方法，其特征在于：包括马铃薯块茎RNA的提取、RT‑PCR反应和PCR产物的核酸胶体金层析试纸条检测步骤，具体如下：取待测马铃薯块茎组织样本，在所研制的马铃薯块茎RNA提取缓冲液中研磨，研磨所得汁液即可作为病毒RNA进行反转录；取研磨后的汁液，并加入随机引物、无RNA水解酶（RNase）的水、反转录酶、缓冲液、dNTPs、RNA酶抑制剂等进行反转录；以反转录产物为模板，加入待测马铃薯病毒的特异性引物（上游引物、下游引物分别标记了生物素、荧光素）、缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、无RNase的水进行PCR扩增；采用常规方法制备胶体金溶液、胶体金‑兔抗生物素多克隆抗体结合物、层析试纸条，在检测点加入荧光素的单克隆抗体，在质控点加入羊抗兔多克隆抗体；将步骤2所得PCR产物与胶体金‑兔抗生物素多克隆抗体结合物混合后插入试纸条，10 min后，检测点和质控点均显色为阳性，仅质控点显色为阴性。