Taqman探针实时定量PCR检测双歧杆及大肠杆菌的方法

摘要

本发明公开了Taqman探针实时定量PCR检测双歧杆菌及大肠杆菌的方法，包括步骤：A)提取待检测样品中双歧杆菌及大肠杆菌的细菌基因组DNA；B)依据双歧杆菌和大肠杆菌的相关序列合成引物及Taqman探针；C)将步骤B所述引物和探针与其他PCR反应试剂组成反应体系，进行Taqman探针实时定量PCR反应。本发明中，采用双色标记Taqman探针，双重绝对定量PCR方法，可以一次同时准确定量一个样本中两种肠道细菌，可节省检测成本及检测时间，减少因多次检测而造成的误差。

主权项

一种Taqman探针实时定量PCR检测双歧杆菌及大肠杆菌的方法，包括步骤：A)提取待检测样品中双歧杆菌及大肠杆菌的细菌基因组DNA；B)依据双歧杆菌和大肠杆菌的相关序列合成引物及Taqman探针：所述的双歧杆菌的扩增引物核苷酸序列为F：5’‑AGAGTGGCGAACGGGTGA‑3’，R：5’‑AGGACGCGACCCCATCCC‑3’，Taqman探针的核苷酸序列为p‑bif：5’‑HEX‑ATGCGTGACCGACCTGCCCC‑TAMRA‑3’；所述的大肠杆菌的扩增引物核苷酸序列为F：5’‑ACAATGGGCGCAAGCCT‑3’，R：5’‑TCTGCGGGTAACGTCAATGA‑3’，Taqman探针的核苷酸序列为p‑eco：5’‑FAM‑CAAAGGTATTAACTTTACTCCCTTCCTCCCCGC‑TAMRA‑3’；C)将步骤B所述引物和探针与其他PCR反应试剂组成反应体系，进行Taqman探针实时定量PCR反应。