一种单管定性并定量检测多个目标核酸序列的方法

摘要

本发明公开了一种单管定性并定量检测多个目标核酸序列的方法，其包括如下步骤：(1)在目标对象基因序列中选取相对保守的区域设计通用扩增引物；(2)在引物扩增产物中选取差异度较大的区域设计能够识别各种目标核酸序列的特异探针，同时设计多个检测通道，将探针设计为多组，每组的探针配备相同的荧光基团作为一个检测通道，在探针设计过程中通过调整探针的长度和/或探针的碱基组成对每条探针的熔点(Tm)值进行人为控制，使得同一检测通道内针对不同目标序列的检测探针Tm值都间隔合适的差值；(3)通过熔点曲线分析分辨靶序列。本发明单个反应管内的每个荧光通道均可定性检测多个目标核酸序列；同时能够确定各个目标核酸序列的拷贝数；在多个目标序列共存的情况下能够判断目标序列间的比例。

主权项

一种单管定性并定量检测多个目标核酸序列的方法，包括如下步骤：(1)在目标对象基因序列中选取相对保守的区域设计通用扩增引物；(2)在引物扩增产物中选取差异度较大的区域设计能够识别各种目标核酸序列的特异探针，同时设计多个检测通道，将探针设计为多组，每组的探针配备相同的荧光基团作为一个检测通道，在探针设计过程中通过调整探针的长度和/或探针的碱基组成对每条探针的熔点值进行人为控制，使得同一检测通道内针对不同目标序列的检测探针Tm值都间隔合适的差值；(3)通过熔点曲线分析分辨靶序列。