Vero-SIAT1细胞系及其应用

摘要

本发明涉及构建一种Vero-SIAT1细胞系，并且在此细胞系内繁殖流行性感冒病毒的方法，以及由此方法制备的新型流行性感冒灭活疫苗。特别是公开了一种在Vero-SIAT1细胞内繁殖流行性感冒病毒的方法，将流行性感冒病毒接种Vero-SIAT1细胞，培养、收获病毒液，经灭活、纯化制备单价原液。本发明属于疫苗制备工艺技术领域。

主权项

构建一种Vero‑SIAT1细胞系，该细胞系可作为制备新型流行性感冒疫苗的基质。其特征在于：稳定地转染Vero细胞用人类α2，6‑唾液酸转移酶(SIAT1)的cDNA，它的产物催化糖蛋白上的半乳糖α2，6‑唾液酸化作用，进而增加人类流感病毒的受体。Vero细胞被带有SIAT1的cDNA和新霉素抗性基因的质粒转染，并且被G418硫酸盐筛选。稳定转染后，通过Western blot和免疫荧光显微技术证明，在Vero细胞中过表达SIAT1基因。通过SNA和MAA染色方法表明，与亲本的vero细胞相比，稳定转染的vero细胞分别表达7倍高量的α2，6‑唾液酸，和3倍低量的α2，3‑唾液酸。此外，流行性感冒病毒A1、A3亚型及B型在Vero‑SIAT1细胞中繁殖具有更高的病毒滴度。Vero‑SIAT1细胞系不仅有利于繁殖人类流感病毒，而且有利于流感疫苗的研究。