从鹰嘴豆豆瓣中提取天然抗肿瘤活性蛋白质和多肽的方法

摘要

本发明涉及一种从鹰嘴豆豆瓣中提取天然抗肿瘤活性蛋白质和多肽的方法，该方法通过磷酸缓冲溶液提取、硫酸铵沉淀，除盐和离心等步骤，即可得到能够抑制结肠癌细胞活性的蛋白质和多肽。为维吾尔药食两用植物鹰嘴豆的生物活性物质基础研究，并开发相应的产品提供了依据。该方法提取过程简单，又不易使蛋白质和多肽失活，制备的多肽生物活性高，无毒性、热稳定性好，易于扩大规模生产，降低提取过程的成本，是提取制备生物活性蛋白质和多肽的理想方法之一。通过该方法获得的蛋白质和多肽作为制备功能食品或药品添加剂的用途。

主权项

一种从鹰嘴豆豆瓣中提取天然抗肿瘤蛋白质和多肽的方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将鹰嘴豆清洗除去杂物，浸泡1h‑8h；b、将步骤a清洗、浸泡的鹰嘴豆放入豆芽箱内发芽，温度为15‑30℃，水温15‑30℃，淋水时间3‑10秒，淋水间隔2‑6小时，发芽时间3‑7天；c、将步骤b发芽的鹰嘴豆豆芽上的芽和豆瓣分开，并分别晾干；d、将步骤c晾干燥的鹰嘴豆豆瓣粉碎，过10‑60目筛后，用正己烷进行冷浸脱脂，所得脱脂粉备用；e、将步骤d脱脂粉用液氮研磨，再用磷酸缓冲液搅拌提取，时间为1‑5小时，过滤，将滤液用低温离心机除去沉淀，得到上清液备用，其中磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.01‑0.1mol/L，pH＝4.0‑10.0；f、将步骤e上清液加入无水硫酸铵，充分搅拌溶解后放置冰箱静置24小时，低温离心，时间20min，将沉淀用水溶解透析脱盐后，再进行低温离心，时间20min，沉淀干燥即可得到抗肿瘤活性蛋白质和多肽，其中无水硫酸铵饱和度为30％‑80％；g、再利用常规方法十二烷基磺酸钠‑聚丙烯酰胺凝胶电泳确定提取的蛋白质和多肽的成分及其分子量，对提取的蛋白质和多肽进行抑制结肠癌细胞的活性来确定提取的蛋白质和多肽的抗肿瘤活性。