发明名称 |
一种邻苯二甲酸二乙酯的检测方法 |
摘要 |
本发明公开了一种邻苯二甲酸二乙酯的检测方法,包括以下步骤:a:标准曲线的建立步骤:b:样品的检测步骤;本发明与现有技术相比,该发明中提供的塑化剂邻苯二甲酸二乙酯(DEP)抗体的特异性强,在交叉反应试验中,对检测的几大邻苯二甲酸酯类物质几乎无任何交叉反应,因此其选择性很高,从而简化了样品前处理过程。本发明的灵敏度为0.0049ng/ml,较之文献报道用直接竞争酶联免疫法测定DEP的浓度(Analytical Biochemistry 406(2010)24-28)0.096ng/ml,灵敏度明显提高,与标准方法高效液相色谱法0.88ng/ml比较,灵敏度提高了两个数量级。 |
申请公布号 |
CN102539743A |
申请公布日期 |
2012.07.04 |
申请号 |
CN201110419687.9 |
申请日期 |
2011.12.15 |
申请人 |
安徽师范大学 |
发明人 |
张明;于晓娜 |
分类号 |
G01N33/543(2006.01)I;G01N33/531(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/543(2006.01)I |
代理机构 |
芜湖安汇知识产权代理有限公司 34107 |
代理人 |
方南 |
主权项 |
一种邻苯二甲酸二乙酯的检测方法,包括以下步骤:a:标准曲线的建立步骤:在建立邻苯二甲酸二乙酯的标准曲线之前,先配制不同浓度的标准品:邻苯二甲酸二乙酯标准品用1‑2mL的无水乙醇溶解后,用稀释液稀释至一系列浓度,分别为0.0048ng/ml、0.0097ng/ml、0.14ng/ml、0.29ng/ml、1.2ng/ml、2.3ng/ml、9.3ng/ml、18ng/ml:竞争时加入这一系列浓度的标准液,测定结果的平均值经过Origin6.0软件处理后绘制成标准曲线;(1)包被步骤:用邻苯二甲酸二乙酯包被抗原包被96孔酶标板,每孔100μL,放置培养箱37℃温育2h后,从培养箱内取出,甩掉孔内溶液,再用洗涤液洗涤并甩干,每次洗涤3‑5min,总共洗涤3次;(2)封闭步骤:在包被好的酶标准版中加入1%卵清蛋白溶液,每孔150μL,37℃温育30min后,甩掉孔内溶液,再用洗涤液洗涤并甩干,每次洗涤3‑5min,总共洗涤3次;(3)竞争步骤:每孔加入50μL邻苯二甲酸二乙酯标准溶液和50μL邻苯二甲酸二乙抗体,37℃下温育3h后,从培养箱内取出,甩掉孔内溶液,再用洗涤液洗涤并甩干,每次洗涤3‑5min,总共洗涤3次;(4)显色步骤每孔加入100μL酶标羊抗兔抗抗体,37℃下温育3h后,从培养箱内取出,甩掉孔内溶液,再用洗涤液洗涤并甩干,每次洗涤3‑5min,总共洗涤3次;每孔加入100μL底物液,37℃下温育30min,从培养箱内取出,每孔加入50μL终止液;(5)检测步骤:用多功能酶标仪测定各孔在波长为490nm吸收光强度;b:样品的检测步骤除(3)竞争步骤:每孔加入50μL样品溶液和50μL的邻苯二甲酸二乙酯抗体,37℃下温育3h后,从培养箱内取出,甩掉孔内溶液,再用洗涤液洗涤并甩干,每次洗涤3‑5min,总共洗涤3次;外,其余与a:标准曲线的建立步骤相同。 |
地址 |
241000 安徽省芜湖市弋江区花津南路安徽师范大学 |