硫酸软骨素交联胶原蛋白/羟基磷灰石复合支架材料的制备方法

摘要

本发明涉及一种硫酸软骨素交联胶原蛋白/羟基磷灰石复合支架材料的制备方法。该方法通过将硫酸软骨素与胶原蛋白预先均匀混合后沉淀制备出含有硫酸软骨素的胶原蛋白/羟基磷灰石浆料，将浆料发泡并冷冻干燥得到三维多孔支架材料，最后通过交联剂交联，构建了硫酸软骨素交联胶原蛋白/羟基磷灰石复合支架。该工艺过程简洁，多孔支架的孔隙可控，通过预混合后交联的方式促进交联效果，增强支架的力学强度，整个过程采用的试剂安全无毒性，生物相容性高，是一种适用于制备组织工程材料的方法。

主权项

一种硫酸软骨素交联胶原蛋白/羟基磷灰石复合支架材料的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为：(1).将胶原蛋白Col溶于醋酸溶液中，4℃下配制成浓度为：1%～1.5%g/L的Col溶液，并调节pH值至中性；用超纯水溶解硫酸软骨素CS制成浓度为：1%～1.5%g/L的CS溶液；(2)按Col溶液与CS溶液的体积比为5:1～9:1的比例，在4℃搅拌下，将CS溶液缓慢滴加到Col溶液中；(3)向步骤(2)得到的溶液中加入可溶性钙盐溶液和磷酸盐溶液，其中钙磷的计量比为1.67：1，并控制Co与羟基磷灰石的质量比为1:9～3:7，缓慢加热到40℃，并搅拌20分钟；调节pH值为7，出现白色悬浊液，持续搅拌24小时；(4)将步骤(3)所得的沉淀物清洗并离心，干燥，得到硫酸软骨素‑胶原蛋白/羟基磷灰石粉末；(5)将步骤(4)得到粉末和羧甲基纤维素按100:0.2～2的质量比与双氧水溶液进行调和至粘稠状后搅拌30分钟发泡，得到浆料；(6)将步骤(5)所得到的浆料快速移入12孔细胞培养平板，并立即放入‑20 ℃ 冰箱预冷冻24h；取出，于‑50 ℃ 冷冻干燥，得到硫酸软骨素‑胶原蛋白/羟基磷灰石多孔支架材料；(7)将步骤(6)所得到的多孔支架浸泡于50mmol/L的2‑吗啉乙烷磺酸0MES的40%乙醇溶液30min；取出，再浸泡于50mmol/L的 2‑吗啉乙烷磺酸MES、20mmol/L的碳化二亚胺 EDC、5mmol/L 的琥珀酰胺NHS的40%乙醇溶液24h；得到交联材料；(8)将步骤(7)所得交联材料在依次在0.1 mol/L Na2HPO4溶液、1mol/L的 NaCl溶液以及2mol/L NaCl溶液中清洗，用超清洗10次，冷冻干燥，就得到硫酸软骨素交联胶原蛋白/羟基磷灰石多孔支架材料。