一种液相合成缩宫素的方法

摘要

本发明公开了一种液相合成缩宫素的方法，包括如下步骤：(1)苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酸的制备；(2)苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酰谷氨酰胺的制备；(3)苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺的制备；(4)苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰苄基半胱氨酸的制备；(5)脯氨酰亮氨酰谷氨酰胺以活泼酯的方法接肽然后去除保护基得到；(6)苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰苄基半胱氨酰脯氨酰亮氨酰谷氨酰胺的制备；和(7)脱帽反应。本发明工艺简单，步骤少，操作条件温和，三废少，生物活性高(效价)，以甘氨酸计总收率达到25％。

主权项

一种液相合成缩宫素的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)、苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酸的制备：将苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酸加入N，N‑甲基甲酰胺中，充分溶解，温度降至0～‑25℃，然后慢慢加入二苯磷酰基叠氮化物，保持反应温度的情况下加入异亮氨酸，使料液澄清，放置冰箱2d，保持温度5～‑10℃；苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酸∶二苯磷酰基叠氮化物∶异亮氨酸的摩尔比是1∶1∶(1.2‑1.5)，N，N‑二甲基甲酰胺的用量是苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酸、二苯磷酰基叠氮化物和异亮氨酸3种物料总重量的3～10倍；接肽完毕，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯用量是苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酸、二苯磷酰基叠氮化物和异亮氨酸3种物料总重量的3～5倍，石油醚析出结晶，干燥备用；(2)、苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酰谷氨酰胺的制备：将步骤(1)制备的苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酸结晶体加入N，N‑二甲基甲酰胺中，充分溶解，温度降至0～‑25℃然后慢慢加入二苯磷酰基叠氮化物，保持反应温度的情况下加入谷氨酰胺，使料液澄清，放置冰箱2d，保持温度5～‑10℃；苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酸∶二苯磷酰基叠氮化物∶谷氨酰胺的摩尔比是1∶1∶(1.2～1.5)；N，N‑二甲基甲酰胺的用量是前3种物料总重量的3～10倍；接肽完毕，减压浓缩，除去2/3溶剂，以石油醚和乙醚的混合液析出结晶，干燥备用；(3)、苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺的制备：将步骤(2)制备的结晶体加入三氯甲烷中，充分溶解，温度降 至0～‑25℃然后慢慢加入二苯磷酰基叠氮化物，保持反应温度的情况下加入天冬酰胺，使料液澄清，放置冰箱2d，保持温度5～‑10℃；步骤(2)制备的结晶体∶二苯磷酰基叠氮化物∶天冬酰胺的摩尔比是1∶1∶(1.2～1.5)，三氯甲烷的用量是步骤(2)制备的结晶体、二苯磷酰基叠氮化物和天冬酰胺3种物料总重量的3～10倍；接肽完毕，减压浓缩，除去2/3溶剂，以石油醚和乙醚的混合液析出结晶，干燥备用；(4)、苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰苄基半胱氨酸的制备：将步骤(3)制备的结晶体加入N，N‑二甲基甲酰胺中，充分溶解，温度降至0～‑25℃然后慢慢加入二苯磷酰基叠氮化物，保持反应温度的情况下加入苄基半胱氨酸，使料液澄清，放置冰箱2d，保持温度5～‑10℃；步骤(3)制备的结晶体∶二苯磷酰基叠氮化物∶苄基半胱氨酸的摩尔比是1∶1∶(1.1～1.3)，N，N‑二甲基甲酰胺的用量是步骤(3)制备的结晶体、二苯磷酰基叠氮化物和苄基半胱氨酸3种物料总重量的5～10倍；接肽完毕，加入乙酸乙酯液析出结晶，干燥备用；(5)、脯氨酰亮氨酰谷氨酰胺以活泼酯的方法接肽然后去除保护基得到；(6)苄氧羰酰苄基半胱氨酰酪氨酰异亮氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰苄基半胱氨酰脯氨酰亮氨酰谷氨酰胺的制备：将步骤(4)制备的结晶体加入N，N‑二甲基甲酰胺中，充分溶解，温度降至0～‑25℃然后慢慢加入二苯磷酰基叠氮化物，保持反应温度的情况下加入步骤(5)制备的脯氨酰亮氨酰谷氨酰胺使料液澄清，放置冰箱3d，保持温度5～‑10℃；待结晶析出，过滤，用乙酸乙酯洗涤3～8次，五氧化二磷真空干燥，得到缩宫素带保护基的前体九肽酰胺； 步骤(4)制备的结晶体∶二苯磷酰基叠氮化物∶脯氨酰亮氨酰谷氨酰胺的摩尔比是1∶1∶(1.1～1.3)，N，N‑二甲基甲酰胺的用量是步骤(4)制备的结晶体、二苯磷酰基叠氮化物和脯氨酰亮氨酰谷氨酰胺3种物料总重量的5～10倍；(7)将缩宫素带保护基的前体九肽酰胺用氨钠法去除保护基，得到粗品还原型九肽酰胺，将粗品溶于水中，调节pH值为6～8之间，通入空气进行氧化，还原型消失，过滤，滤液经葡聚糖G15、G20或G25柱纯化，用高效液相色谱法跟踪收集流出液，得到高纯缩宫素原液。