| 主权项 |
一种保持病毒活性的高通量切向流分离海洋藻类病毒的方法，其特征在于包括下述步骤：1)在4～8℃的低温和暗室条件下进行一级过滤；首先用0.2μm的滤芯对海水样品进行预过滤处理：调节蠕动泵的泵速为90～100rpm之间，去除直径大于0.2μm的颗粒或细菌，得到预处理后的海水样品；整个操作在4～8℃的暗室条件下进行；然后用切向流膜包对预处理后的海水样品进行超滤浓缩处理：调节蠕动泵的泵速在110～120rpm之间；首先关闭透过液阀门，打开回流液阀门，然后慢慢开启透过液阀门，调节回流液阀门至如下参数：进水压Pinlet＝1～2ba，回流压Poutlet＝0.5～1ba，按体积比1000∶1～500∶1浓缩，对预处理后的海水样品反复进行切向流渗透，获得粗浓缩病毒液；2)在无菌、4～8℃和暗室条件下进行二级过滤；首先用0.1％～0.5％(M/V)的小牛血清白蛋白润湿0.22μm无菌针头式过滤器，在该过滤器中对粗浓缩病毒液进行过滤，进一步去除直径大于0.22μm的非病毒性颗粒和一级过滤操作中可能污染的杂菌，得到纯度较高的浓缩病毒液；3)特异性海洋藻病毒的分离；用经二级过滤的浓缩病毒液，对预先培养的不同种类的海洋藻细胞进行反复的液体感染，即可建立藻病毒‑宿主藻的特异性系统，分离出浓缩病毒液中具有特异性的海洋藻类病毒。 |
