监视亚硫酸氢盐介导的DNA转化的方法

摘要

本发明涉及在DNA甲基化分析期间监视亚硫酸氢盐介导的DNA转化的发展的方法。所述方法基于酶尿嘧啶-DNA-糖基化酶（UNG）与至少一种标记的DNA报告分子的反应，所述报告分子在其序列中包含至少一个未甲基化的胞嘧啶残基。在尿苷残基中未甲基化的胞嘧啶残基的亚硫酸氢盐介导的转化之后，UNG从DNA骨架中除去尿嘧啶碱基，因而使得它对热诱导的水解切割敏感。最后，检测在这种断裂过程期间从DNA报告分子释放的标记物。

主权项

用于在DNA甲基化分析期间监视亚硫酸氢盐介导的DNA转化的方法，包括：（a）提供要分析的样品DNA和至少一种DNA报告分子，其中所述至少一种DNA报告分子包含：     （i）在它的核苷酸序列中至少一个未甲基化的胞嘧啶残基；以及     （ii）至少一种标记物；以及其中所述样品DNA和所述至少一种DNA报告分子在相互流体连接的、空间上分隔的反应区室中提供；（b）向所述空间上分隔的反应区室添加亚硫酸氢盐，从而介导所述样品DNA和所述至少一种DNA报告分子的核苷酸序列中包含的未甲基化的胞嘧啶残基向尿苷残基的转化；（c）向所述至少一种DNA报告分子添加尿嘧啶‑DNA‑糖基化酶，从而介导步骤（b）中获得的尿嘧啶碱基从DNA主干上脱除；（d）通过热处理来断裂步骤（c）中获得的DNA；以及（e）检测在步骤（d）期间从所述至少一种合成的DNA报告分子释放的至少一种标记物。