提高固定化脂肪酶活性和稳定性的方法

摘要

一种提高固定化脂肪酶活性和稳定性的方法。采用能改变脂肪酶分子构象以及载体对脂肪酶的吸附状态的极性有机溶剂为处理剂，对吸附固定的脂肪酶浸泡适当时间而成；所述的固定化载体选取40目活性炭、或硅胶G、或DM-130树脂，所述的有机化合物选取醇、酮、酯中的一种为固定化酶处理剂。将吸附固定的脂肪酶浸泡于有机化合物处理剂中，再对浸泡的固定化脂肪酶进行分离收集和干燥处理，即得催化活性和稳定性得以提高的固定化脂肪酶。所得处理的固定化脂肪酶可用作于油脂的转酯化、合成或水解，其酶活力为对照的1.5～2.5倍、半衰期延长3～8h、催化大豆油转酯化反应延长使用3-6批。改善了固定化酶的使用性能。

主权项

提高固定化脂肪酶活性和稳定性的方法，其特征在于包括如下步骤：a、脂肪酶液制备：取15g酶粉溶于300ml、pH7.0的磷酸缓冲液；所述pH7.0的磷酸缓冲液组成为：0.05mol/L K2HPO4‑KH2PO4；所述酶粉为脂肪酶LVK‑F100；b、脂肪酶固定化：将1g经预处理的固定化载体加入30～50ml酶液中，于30℃、150rpm振荡吸附2h；所述固定化载体为40目活性炭、或硅胶G、或DM‑130树脂，其预处理方法为：用1mol/LHCl于室温下浸泡3h，然后水洗至中性；c、固定化脂肪酶的分离和存放：过滤分离得湿固定化酶，于4℃放置24h；d、有机溶剂处理：在20～50ml极性有机溶剂中加入1g湿固定化酶，于25～35℃、150rpm振荡处理1～1.5h，抽滤得处理过的固定化酶，于4℃放置24h，测定酶活力；所述有机溶剂为极性有机溶剂丙醇、丙酮、乙酸乙酯；e、大豆油转酯化：将22.5g大豆油、11ml正己烷及1g有机溶剂处理过的固定化酶混合，于30℃预热20min，按醇油摩尔比3：1平均分3次加入无水甲醇，于150rpm振荡反应24h；f、固定化脂肪酶催化剂回收：转酯化反应结束后，用丙酮洗涤固定化脂肪酶催化剂3次，于4℃干燥24～48h，测定酶活力。