河西绒山羊流产病抗性等位基因检测试剂盒和使用方法

摘要

本发明涉及动物生物技术领域中的山羊分子标记辅助育种技术，具体涉及到河西绒山羊流产病抗性等位基因检测试剂盒。一种河西绒山羊流产病抗性等位基因PCR-SSCP检测试剂盒，其特征是包括有第一PCR反应液，第二PCR反应液，GOLA-DRB1*03和GOLA-DRB1*11的DNA标准样；SSCP检测试剂，去离子水，10%过硫酸铵，上样变性缓冲液，TEMED，12%的非变性聚丙烯酰胺凝胶Arc:Bis=37.5:1；所述的上样变性缓冲液，包括98%去离子甲酰胺，0.025%溴酚蓝，0.025%二甲苯青，10mmol/LEDTApH8.0。本发明的优点是本发明对河西绒山羊流产病的分子标记选种具有快速、敏感性高、成本低等特点。

主权项

一种河西绒山羊流产病抗性等位基因PCR‑SSCP检测试剂盒，其特征是包括有第一PCR反应液，第二PCR反应液，GOLA‑DRB1*03和GOLA‑DRB1*11的DNA标准样；SSCP检测试剂，去离子水，10%过硫酸铵，上样变性缓冲液，TEMED，12%的非变性聚丙烯酰胺凝胶Arc:Bis=37.5:1；所述的上样变性缓冲液，包括98%去离子甲酰胺，0. 025%溴酚蓝，0. 025%二甲苯青，10mmol/L EDTA pH 8. 0；所述的第一PCR反应液的反应液：总体积20μL，其中10×buffer缓冲液为2.0μL ，Mg2 +浓度为2.5mM，dNTPs的终浓度为 100μM，引物DRB1.1和GIo各0.1μM，Taq聚合酶0.5U，模板DNA50ng，ddH2O补充体积至20μL；所述的第二PCR反应液的反应液：总体积20μL，其中10×buffer缓冲液为2.0μL ，Mg2 +浓度为2.5mM，dNTPs的终浓度为 100μM，引物DRB1.1和DRB1.2各0.1μM，Taq聚合酶0.5U，稀释10倍后的第一轮PCR产物1.0μL，ddH2O补充体积至20μL；所述的GOLA‑DRB1*03的DNA标准样的核苷酸序列为：ctggagtatc ataagagcga gtgtcatttc ttcaacggga ccgagcgggc gcggttcctg    60gacagatact tctataatgg agaagagtac gtgcgcttgg acaacgactg gggcgagttc   120cgggcggtgg ccgagctggg gcggcagacc gccaagtact ggaacagcca gaaggagctc   180ctggagcgga ggcggaccga ggtggacacg ttctgcagac acaactacgt ggtcttt      240所述的GOLA‑DRB1*11的DNA标准样的核苷酸序列为：ctggagtatc ataagagcga gtgtcatttc ttcaacggga ccgagcgggt gtggtacctg    60gacagatact tctataatgg agaagagtac gtgcgcttcg acaacgactg gggcgagtac   120cgggcggtgg ccgagctggg gcggccggac gccaagtact ggaacagcca gaaggagatc  180ctggagcagaggcggaccgaggtggacacggtgtgcagacacacatacggggtaggt     240。