开关式核酸适体探针及其在肿瘤活细胞及活体检测中的应用

摘要

本发明属于核酸检测技术领域，具体公开了一种开关式核酸适体探针及其应用，该核酸适体探针包括探针本体和分别连接于该探针本体两端的荧光发生单元和荧光熄灭单元，探针本体包含有对目标肿瘤细胞具有特异性识别功能的核酸适体片段和与该核酸适体片段形成互补序列的核酸片段，核酸适体片段和核酸片段通过一7～15nm长的连接片段连接形成一发夹型结构；核酸片段竞争性杂交核酸适体片段的能力弱于目标肿瘤细胞。本发明探针的应用可以是对缓冲液中肿瘤活细胞的特异性检测、对血清中肿瘤活细胞的有效检测及活动物体内肿瘤的实时荧光成像和活体检测中的至少一种。本发明的探针具有较高稳定性、特异性和灵敏性，其应用操作简单、快速、灵敏、特异、成本低。

主权项

一种开关式核酸适体探针，其特征在于：该核酸适体探针包括探针本体和分别连接于该探针本体两端的荧光发生单元和荧光熄灭单元，所述探针本体包含有对目标肿瘤细胞具有特异性识别功能的核酸适体片段和与该核酸适体片段形成6～12对碱基互补序列的核酸片段，所述核酸适体片段和核酸片段通过一7～15 nm长的连接片段连接形成一发夹型结构；所述核酸片段竞争性杂交所述核酸适体片段的能力弱于所述目标肿瘤细胞杂交核酸适体片段的能力；所述核酸适体片段是一段对CCRF‑CEM肿瘤细胞具有特异性识别能力的DNA，其核苷酸序列为：5’‑ ATC TAA CTG CTG CGC CGC CGG GAA AAT ACT GTA CGG TTA GA ‑3'；所述连接片段是一段由多个胸腺嘧啶脱氧核苷酸聚合而成的DNA，其核苷酸序列为：5’‑ TTT TTT TTT TTT TTT TT ‑3'；所述核酸片段是一段与所述核酸适体片段部分序列互补的DNA，其核苷酸序列为：5’‑ CTA ACC GT ‑3'；上述三个片段依次连接好后组成的所述开关式核酸适体探针的全序列为：[5’‑Cy5‑ CTA ACC GT TTT TTT TTT TTT TTT TT ATC TAA CTG CTG CGC CGC CGG GAA AAT ACT GTA CGG TTA GA ‑BHQ2‑3']。