水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、柑桔溃疡病菌和甘蓝黑腐病菌的检测方法

摘要

本发明公开了水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、柑桔溃疡病菌和甘蓝黑腐病菌的检测方法，本方法通过两对引物同时对检测样本的DNA模板进行PCR反应扩增得到PCR产物，然后PCR产物与基因芯片上设置的特异性探针杂交，根据杂交结果阳性与否，来判断出检测样本是否含有水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、柑桔溃疡病菌或甘蓝黑腐病菌；本发明能一次性对4种细菌完成检测，检测速度快，并且检测结果直观明了，容易判断。

主权项

水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、柑桔溃疡病菌和甘蓝黑腐病菌的检测方法，包括如下步骤：a、提取DNA：提取检测样本的基因组DNA，制得DNA溶液；b、DNA模板PCR反应：以DNA溶液作为模板，用引物进行PCR反应，扩增得到PCR产物；其中，引物包括引物XrpoD‑F/XrpoD‑R和引物PSRG‑F/PSRG‑R两对引物，序列分别如下，正向引物XrpoD‑F：CGGCTTCAACGACCTGATY，反向引物XrpoD‑R：GAYCTTCTTGAACTTGGCGTAT，正向引物PSRG‑F：GAATATCAGCATCGGCAACAG，反向引物PSRG‑R：TACCGGAGCTGCGCGTT；c、杂交：将PCR产物与基因芯片上的特异性探针杂交；其中，特异性探针包括探针Xoo‑S1、探针Xooc‑S1、探针Xac‑A1和探针Xcc‑S2，序列分别如下：探针Xoo‑S1：NH2‑TTTTTTTTTTGAGGATGCGCTGGATGAAG，探针Xooc‑S1：NH2‑TTTTTTTTTTGAGGATGCGGTGGATGAAG，探针Xac‑A1：NH2‑TTTTTTTTTTGACACGGCGACCGGAC，探针Xcc‑S2：NH2‑TTTTTTTTTTCTCGGGTATCAGCCGTGGTCGC，探针Xoo‑S1对应水稻白叶枯病菌；探针Xooc‑S1对应水稻细菌性条斑病菌；探针Xac‑A1对应柑桔溃疡病菌；探针Xcc‑S2对应甘蓝黑腐病菌；d、采集杂交结果；e、分析判断：根据采集到的杂交结果，分析杂交结果是否为阳性，如果特异探针呈阳性，则检测样本中含有该特异探针对应的病菌，反之阴性则不含有该特异探针对应的病菌。