在蔷薇科植物多次继代培养中降低出现玻璃化的快繁育苗方法

摘要

本发明提供了一种在蔷薇科植物多次继代培养中降低出现玻璃化的快繁育苗方法，包括外植体的消毒、芽的诱导、继代增殖、生根诱导，其特征在于：在继代增殖过程中，相间进行试管苗复壮培养，然后再选取健壮的1cm～3cm高的试管苗转到生根培养基中诱导生根，得到完整试管植株，所述的复壮培养采用的是不含任何外源植物激素的启动培养基壮苗。本发明的方法快速、高效，成本低，便于推广，遗传稳定性好，培养过程中玻璃化比例低，增殖系数维持在较高水平，适用于蔷薇科植物组培快繁。

主权项

一种在豆梨多次继代培养中降低出现玻璃化的快繁育苗方法，包括外植体的消毒、芽的诱导、继代增殖、生根诱导，其特征在于：在继代增殖过程中，相间设置试管苗复壮培养，然后再选取健壮的试管苗转到生根培养基中诱导生根，得到完整试管植株，所述的试管苗复壮采用的是不含任何外源植物激素的MS启动培养基进行培养，具体步骤如下：a)外植体的消毒：将豆梨带腋芽的幼茎作为外植体，切段，消毒，无菌水冲洗；b)芽的诱导：将经上述处理的外植体切成单芽茎段，接种于不含任何外源植物激素的MS启动培养基，在25±2℃、1500～2000Lux、12～14h/d光照培养20～30d得到无根苗；c)继代增殖：将上述无根苗分别接种在MS增殖培养基上，在25±2℃、1500～2000Lux、12～14h/d的环境下光照培养20～30d，形成正常增殖的丛生试管苗，切分后重复继代增殖；d)试管苗复壮培养：经过1～4次继代增殖后的丛生试管苗切割分株，接种于不含任何外源植物激素的MS启动培养基，在25±2℃，1500～2000Lux、12～14h/d光照培养20～35d，获得复壮试管苗；e)将复壮的试管苗重新接种在MS增殖培养基上按照步骤c的培养条件，继代培养后再将丛生试管苗分株转入生根诱导；或直接将至少经过一次试管苗复壮培养的复壮试管苗转入生根诱导；f)生根诱导：从转入生根诱导的试管苗中选取1cm～3cm高的健壮苗转入生根培养基中，在25±2℃、暗培养7d～10d后，再转入到1500～2000Lux，12～14h/d光照培养，25～35d，获得完整试管植株；所述的不含任何外源植物激素的MS启动培养基为：MS培养基+25～35g/L蔗糖+5.0g/L琼脂粉；所述的MS增殖培养基为：MS+0.3～0.6mg/L 6‑BA+0.1～0.6mg/L NAA+25～35g/L蔗糖+5.0g/L琼脂粉，pH 5.8；所述的生根培养基为：1/2MS培养基+0.5～2.0mg/L IBA+20g/L蔗糖+5.0g/L琼脂粉，pH 5.8。