一种快速检测和鉴定凤仙花坏死斑病毒的分子生物学方法及其引物

摘要

本发明是一种快速检测和鉴定凤仙花坏死斑病毒的分子生物学方法及其引物，属植物病毒分子生物学检测鉴定领域。本发明提供3对引物，其中引物L6如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；引物M6如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；引物S3如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。用其中任一对引物进行RT-PCR扩增，序列比对相似性大于90％，样品即为INSV。用上述3对引物进行RT-PCR扩增，当分别扩增出744bp、637bp和542bp左右的片段时，不需再进行克隆、测序和序列比对，即可确认样品为INSV，可以避免该检测中假阳性结果，简化了检测过程。

主权项

一种快速检测和鉴定凤仙花坏死斑病毒的分子生物学方法，由提取植物样品的总RNA，用引物进行RT‑PCR扩增，用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，其特征在于：在所述的用引物进行RT‑PCR扩增中是分别用专用引物L6，专用引物M6和专用引物S3进行扩增，在RT‑PCR反应终止后，分别取5μl PCR产物，用琼脂糖电泳检测扩增结果，如果扩增片段大小分别为744bp、637bp和542bp，则该植物样品为凤仙花坏死斑病毒所侵染；所述的专用引物L6是由上游引物和下游引物组成，所述的专用引物L6的上游引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，所述的专用引物L6的下游引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：2所示；所述的专用引物M6是由上游引物和下游引物组成，所述的专用引物M6的上游引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：3所示，所述的专用引物M6的下游引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：4所示；所述的专用引物S3是由上游引物和下游引物组成，所述的专用引物S3的上游引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，所述的专用引物S3的下游引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：6所示。