对多核苷酸模板进行测序的方法

摘要

本发明提供了一种对双链多核苷酸模板进行成对测序的方法，本方法可以确定多核苷酸模板上两个不同且分开的区域中的核苷酸序列。

主权项

一种对固定于固体支持物上的双链多核苷酸第一和第二区域成对测序的方法，其中所述第一和第二区域在同一靶标双链多核苷酸上，该方法包括：(a)提供固体支持物，其上已固定化了多个双链多核苷酸，每个双链多核苷酸都是由其5’端连接在所述固体支持物上的互补的第一和第二模板链所形成的，其中每个双链模板多核苷酸都包含靶标双链多核苷酸；(b)对所述多个双链多核苷酸进行处理使所述双链模板多核苷酸变性，以允许测序引物与所述第一或第二模板链杂交；(c)将第一测序引物与(b)部分中所生成的所述第一或第二模板链杂交；(d)使用利用了聚合酶和经标记核苷酸的引物延伸循环来进行第一测序反应以监测经标记核苷酸在第一测序引物上的掺入，从而生成第一延伸测序引物，并确定模板多核苷酸第一区域的序列；(e)除去步骤(d)中所述延伸测序引物；(f)将第二测序引物与步骤(c)的所述模板链或其互补序列杂交；以及(g)使用利用了聚合酶和经标记核苷酸的引物延伸循环来进行第二测序运行以监测经标记核苷酸在第二测序引物上的掺入，从而生成第二延伸测序引物，并确定模板多核苷酸第二区域的序列，其中确定所述模板多核苷酸的第一和第二区域的序列实现了所述靶标双链多核苷酸的所述第一和第二区域的成对测序。