冻干带状疱疹减毒活疫苗及制备方法

摘要

本发明涉及一种冻干带状疱疹减毒活疫苗及制备方法，属于生物技术领域，该疫苗用于预防老年人带状疱疹。包括Oka株水痘-带状疱疹病毒在2BS人二倍体细胞中的扩增传代、疫苗液收获及冻干。其特征在于利用细胞工厂制备冻干带状疱疹减毒活疫苗，适于规模化生产；采用的保护剂为海藻糖-右旋糖酐保护剂，成品2-8℃、18个月保存稳定性试验结果显示滴度稳定；制备的疫苗滴度不低于4.5LgPFU/ml。

主权项

一种冻干带状疱疹减毒活疫苗，其特征在于：以Oka株水痘‑带状疱疹病毒制备的减毒活疫苗，制备的疫苗滴度不低于4.5LgPFU/ml，所述疫苗的制备方法，包括以下步骤：1）以Oka株水痘‑带状疱疹病毒为毒种，以2BS人二倍体细胞为细胞基质，5%CO2条件下以细胞工厂为培养容器；2）在步骤1）的条件下，以pH7.2‑7.6、含10%‑15%(ml/ml)小牛血清的MEM生长液对2BS人二倍体细胞进行传代，细胞传代比例为1:2‑1:4，37℃培养3‑5天；3）待步骤2）中所述2BS人二倍体细胞长成均匀、致密的单层细胞后，以3/100—8/100的感染复数加入Oka株水痘‑带状疱疹病毒感染细胞，加入pH7.2‑7.6、含2%(ml/ml)小牛血清的MEM维持液，置35℃培养；4）当步骤3）中所述2BS人二倍体细胞出现2%—10%的病变时，弃去细胞工厂内液体，以相当于维持液3倍的阿氏液或PBS液清洗细胞表面，充分振摇后排空洗液，加入pH7.2‑7.6、含0.1%（g/ml）人血白蛋白的MEM维持液，置35℃继续培养；5）当步骤4）中所述2BS人二倍体细胞出现75%以上的病变时，以阿氏液或PBS液清洗细胞表面，排空洗液，加入0.0625%（g/ml）的胰蛋白酶消化液，40ml/层，待细胞呈疏松状，加入MEM液，振摇至细胞脱落，收集至离心杯中；6）将步骤5）中所述细胞于2‑8℃、1000rpm离心15分钟，离心后弃上清液，加入疫苗液重悬沉淀，为疫苗原液；取疫苗原液做无菌试验，无菌检查合格后的原液合并，以高压细胞破碎仪1.5MPa条件下破碎细胞，经澄清过滤后即为半成品；其中疫苗液的成分为海藻糖4‑9%（g/ml）、右旋糖酐0.4‑0.8%（g/ml）、谷氨酸钠1%（g/ml）、尿素0.3%（g/ml）、精氨酸0.3%（g/ml）、人血白蛋白0.5‑1.5%（g/ml）的199培养基；7）将步骤6）中所述半成品冰浴条件下，分装冻干。