TPO基因修饰的人骨髓间质干细胞及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了TPO基因修饰的人骨髓间质干细胞及其制备方法和用途。该人骨髓间质干细胞被由重组腺相关病毒介导的TPO基因所修饰而得到，具体的制备方法依次包括下述步骤：克隆人胎肝TPO基因，构建载体质粒pAAV-TPO-IRES-hrGFP；制备rAAV-TPO病毒载体；培养人骨髓间质干细胞；将rAAV-TPO转染到人骨髓间质干细胞。本发明的TPO基因修饰的人骨髓间质干细胞或TPO基因修饰的入骨髓间质干细胞分泌液可以用于制备促血小板生成药物。由于TPO基因修饰的MSCs通过细胞分泌产生内源性TPO，用于治疗血小板减少，因此不存在注射人重组TPO所出现的副作用。

主权项

TPO基因修饰的人骨髓间质干细胞，其特征在于：所述人骨髓间质干细胞由重组腺相关病毒介导的TPO基因所修饰，该介导TPO基因的重组腺相关病毒通过以下方法制备得到：从人胎肝总RNA经RT‑PCR的方法获得全长TPO cDNA，将该全长TPO cDNA克隆至pAAV‑IRES‑hrGFP载体的多克隆位点，从而构建载体质粒pAAV‑TPO‑IRES‑hrGFP；采用磷酸钙共沉淀法将pAAV‑TPO‑IRES‑hrGFP、pAAV‑RC、pHelper三种质粒共转染至HEK293得到重组腺相关病毒rAAV‑TPO。