一种植物表达载体

摘要

本发明公开了一种植物表达载体及其应用。该载体按照包括如下步骤的方法得到：在出发表达载体pZP201的HindIII和EcoRI酶切位点间插入SEQ ID NO：4所示DNA片段，得到中间载体I；再向中间载体I中的ScaI和ScaI酶切位点间插入含有如下片段的DNA片段：LB、RB和SEQ ID NO：3所示DNA片段，得到目的表达载体。本发明载体可以方便、快捷插入目标基因，外源基因可直接通过一步克隆载体便插入到本发明表达载体中，大大简化了操作步骤，无须构建系列载体，操作简便，省时省力，降低了成本，提高了工作效率。该载体的发明可为植物基因工程育种提供技术支撑，为转基因植物的安全性评价和商业化种植奠定基础。

主权项

一种表达载体，按照包括如下步骤的方法得到：(1)用HindIII和EcoRI酶切载体pZP201，回收载体大片段；用HindIII和EcoRI酶切载体pWMB006，回收4.0kb片段；将所述载体大片段与所述4.0kb片段连接，得到重组载体，记作pWMB011；(2)用KpnI和SacI酶切pWMB011，回收载体大片段；用KpnI和SacI酶切pBluescript II‑KS(‑)，回收108bp片段；将所述载体大片段与所述108bp片段连接，得到重组载体，记作pWMB012；(3)以SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示DNA片段为引物，以pCAMBIA3301载体为模板，进行PCR扩增，得到PCR扩增片段；用HindIII和EcoRI酶切PCR扩增片段，回收酶切产物；用HindIII和EcoRI酶切载体pZP101，回收载体大片段，将所述载体大片段与所述酶切产物连接，得到重组载体，记作pWMB010；(4)用ScaI酶切pWMB012，回收载体大片段；用ScaI酶切pWMB010，回收3.0kb片段，将所述载体大片段与所述3.0kb片段连接，得到重组载体，即为目的表达载体；所述载体pWMB006按照包括如下步骤的方法得到：用HindIII单酶切载体pRTL2，回收2460bp片段；用HindIII单酶切载体pAHC25，回收4175bp的片段；将所述2460bp片段与所述4175bp片段连接，得到重组载体，记作pWMB002；用BamHI及SacI双酶切pWMB002，回收4635bp片段；用BamHI及SacI双酶切载体pTCK303，回收541bp片段；将所述4635bp片段与所述541bp片段连接，得到载体pWMB006。