一种定量检测硫代氧化型辅酶（Thio-NAD）的循环酶检测方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种定量检测硫代氧化型辅酶(Thio-NAD)的循环酶检测方法，包括：配制pH8.5-10.50Tris-HCl缓冲液，其中含有一定量的辅酶I(NADH)、脱氧胆酸钠溶液、3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)、海藻糖，加入含有Thio-NAD的待测样品。3α-HSD将胆酸钠或脱氧胆酸钠脱氢氧化形成3α-酮类固醇，同时将Thio-NAD还原成还原型硫代辅酶(Thio-NADH)；在溶液中NADH的存在下，3α-HSD可将3α-酮类固醇重新还原成胆酸钠或其衍生物，同时将NADH脱氢氧化成NAD+。反应中生成的Thio-NADH在405nm处有最大吸收，通过测定37℃反应一段时间后特定波长下溶液的吸光度值，计算出待物中Thio-NAD的含量。该法绿色环保、测定试剂稳定，特别适合Thio-NAD的批量检测。

主权项

一种定量检测硫代氧化型辅酶(Thio‑NAD)的循环酶检测方法，其特征在于：配制pH8.5‑10.50Tris‑HCl缓冲液，其中含有一定量的辅酶I(NADH)、脱氧胆酸钠、3α‑羟类固醇脱氢酶(3α‑HSD)、海藻糖，加入含Thio‑NAD的待测样品，反应中生成的Thio‑NADH在405nm处有最大吸收，通过测定37℃反应一段时间后特定波长下溶液的吸光度值，计算出待测样品中Thio‑NAD的含量。