| 摘要 |
1. Способ одновременной амплификации и детекции нуклеотидных последовательностей в реакционной смеси, включающий следующие стадии: ! (i) предоставление образца, содержащего по меньшей мере одну нуклеотидную молекулу; ! (ii) предоставление реагентов для осуществления реакции амплификации, причем реагенты включают по меньшей мере четыре зонда, причем ! (а) каждый из зондов является специфическим к нуклеотидной последовательности; ! (б) по меньшей мере два зонда несут одинаковую метку; и !(в) каждый из зондов, который несет одинаковую метку, имеет температуру плавления (Тпл, Tm), которая отличается более чем на 2°С от температуры плавления других зондов с такой же меткой, когда они диссоциируют от своей целевой нуклеотидной последовательности (нуклеотидной последовательности- мишени) при нагревании; ! (iii) амплификацию нуклеотидных последовательностей в процессе реакции; ! (iv) детекцию амплифицированных нуклеиновых кислот путем определения, связан ли меченый зонд со своей нуклеотидной последовательностью; и ! (v) определение температуры, при которой каждый данный меченый зонд диссоциирует от нуклеотидной последовательности, с которой он связан. ! 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что метки зондов представляют собой флуоресцентные метки. ! 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что реакция амплификации представляет собой амплификацию методом полимеразной цепной реакции. ! 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что зонды выбирают из группы, состоящей из зонда TaqMan, молекулярного маяка, зонда по типу "скорпион" и зонда системы LightCycler (лайтциклер), гибридизационного зонда и зонда замещения. ! 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что |
