中药槟榔提取物中槟榔碱的毛细管电泳电化学发光检测方法

摘要

本发明提供一种中药槟榔提取物中槟榔碱的毛细管电泳电化学发光检测方法，首次将毛细管电泳吡啶钌电化学发光分析技术应用于中药槟榔提取物中槟榔碱的检测，本发明的方法操作简单，灵敏度高，对槟榔碱的检测限为5×10-9mol/L；分离功能强大，无污染，运行缓冲溶液中离子液体BMImBF4的使用，不仅导致了场放大进样，还改善了槟榔碱与槟榔提取物存介质的分离选择性。电化学发光试剂吡啶钌反应可逆、光子产率高，大大减少了试剂的消耗，降低检测成本。分析方法绿色环保，样品用量少。采用毛细管电泳电化学发光综合分析仪，辅助一些实验室常用的化学试剂，只需纳升级的进样量即可完成分析任务。

主权项

中药槟榔提取物中槟榔碱的毛细管电泳电化学发光检测方法，步骤和条件如下：1.1待检品的制备：1.1.1槟榔碱标准溶液的制备：把槟榔碱标准品溶解在二次水中，制得浓度为5.0×10‑3mol/L的槟榔碱标准溶液；1.1.2槟榔提取物相关溶液的制备：1.1.2.1槟榔提取物溶液的制备：取0.3g中药槟榔粉末，用2.0mL二次水在超声池中超声萃取30min，萃取操作重复3次，合并萃取液，用0.45μm的滤膜过滤，得到槟榔提取物溶液；1.1.2.2槟榔提取物稀释溶液的制备：向步骤1.1.2.1得到的槟榔提取物溶液加入二次水，定容至250mL，获得槟榔碱提取物稀释溶液；1.1.2.3槟榔提取物稀释加标溶液的制备：向步骤1.1.2.1得到的槟榔提取物溶液中分别加入由步骤1.1.1获得的浓度为5.0×10‑3mol/L的槟榔碱标准溶液，用二次水稀释定容至250mL，获得槟榔提取物稀释加标溶液；1.2检测步骤和条件：1.2.1仪器装置：58cm长、内径50μm未涂层融硅毛细管；直径500μm铂盘工作电极；毛细管电泳电化学发光综合分析仪；1.2.2试剂：槟榔碱的标准品、(Ru(bpy)3Cl2.6H2O)、NaH2PO4、Na2HPO4、NaOH和二次水；所用试剂均为分析纯；以下配制好的溶液在使用之前均经0.45μm滤膜过滤；1.2.3溶液的制备：1.2.3.1背景电解质溶液的配制：(1)磷酸盐缓冲溶液的配制：首先配制浓度为200.0mmol/L的NaH2PO4和浓度为200.0mmol/L的Na2HPO4，再将同浓度的NaH2PO4和Na2HPO4混合配成浓度为100.0mmol/L的磷酸盐缓冲溶液，调整磷酸盐缓冲溶液pH值为7.50；(2)Ru(bpy)32+溶液的配制：用二次水配制10.0mmol/L Ru(bpy)32+溶液；(3)背景电解质溶液的配制：用步骤(1)制备的磷酸盐缓冲溶液与步骤(2)制备的Ru(bpy)32+溶液配制背景电解质溶液；背景电解质溶液中磷酸盐的浓度为50.0mmol/L，Ru(bpy)32+的浓度为5.0mmol/L；1.2.3.2运行缓冲溶液的配制：(1)磷酸盐缓冲溶液的配制：配制浓度为200.0mmol/L的NaH2PO4和浓度为200.0mmol/L的Na2HPO4，将同浓度的二者混合，再用二次水稀释配成浓度为50.0mmol/L的磷酸盐缓冲溶液，调整磷酸盐缓冲溶液pH值为7.50，获得磷酸盐缓冲溶液；(2)BMImBF4溶液的配制：将BMImBF4用二次水稀释配成浓度为50.0mmol/L的溶液；(3) 运行缓冲溶液的配制：将步骤(1)得到的磷酸盐缓冲溶液与步骤(2)获得的BMImBF4溶液混合，再用二次水稀释得到运行缓冲溶液；运行缓冲溶液中磷酸盐浓度为20mmol/L，BMImBF4浓度为10.0mmol/L；1.2.4检测步骤：1.2.4.1分离毛细管的处理：新毛细管柱使用100mmol/L氢氧化钠活化过夜，每天实验之前，毛细管柱用100mmol/L氢氧化钠冲洗10min，再用二次水冲洗10min，然后用由步骤1.2.3.2获得的运行缓冲溶液平衡10min；1.2.4.2中药槟榔提取物中槟榔碱的检测：将步骤1.1.2.2中得到的槟榔提取物稀释溶液和步骤1.1.2.3中得到的槟榔提取物稀释加标溶液按下述条件进行检测：检测电位1.20V；电泳分离高压16kV；检测池中添加步骤1.2.3.1制备的背景电解质溶液；电化学反应采用三电极体系，三电极体系包括直径500μm铂盘工作电极、铂丝对极以及Ag/AgCl参比电极；毛细管长58cm，内径50μm；电泳使用步骤1.2.3.2获得的运行缓冲溶液；采用柱端电化学发光检测模式；光电倍增管偏置电压设定在800V；获得中药槟榔提取物中槟榔碱检测的电泳图谱。