一种细胞核移植方法

摘要

本发明公开了一种细胞核移植方法，包括以下步骤：构建卵母细胞；采用浓度为0.05～20ug/ml的去核试剂，将所述卵母细胞处理0.5～26小时，获得细胞质体；构建具有所需遗传特性的供体细胞或细胞核，将细胞质体与所述供体细胞或细胞核融合，得到重建的胚胎。本发明通过使用去核试剂灭活卵母细胞来去除卵母细胞的细胞核，取代现有技术的细胞核移植技术中需要机械操作去除卵母细胞细胞核的步骤，简化了该步骤的操作，可广泛应用于多种物种的细胞核移植操作中。

主权项

一种细胞核移植方法，包括以下步骤：用0.1ug/ml光辉霉素作为去核试剂，处理经体外培养成熟的猪卵母细胞26小时，或用0.05ug/ml防线菌素作为去核试剂，处理经体外培养成熟的猪卵母细胞20小时，灭活卵母细胞，使之无法进行RNA转录和合成蛋白；取出成熟后的卵母细胞‑卵丘复合体，用透明质酸酶消化卵丘细胞，形成裸卵，便于后续克隆操作；将裸卵放在链酶蛋白酶中消化，去除透明带；用口吸管反复吹打卵母细胞去掉其表面的第一极体即去除极体的遗传物质，将去掉第一极体的卵母细胞用植物凝集素处理，使之表面粘度增加，黏合一个供体细胞在细胞融合仪中，在2.0KV/cm的电击作用下使二者融合；将融合后的胚胎放置在培养液中60分钟，使供体细胞充分融入卵母细胞中，将融合后的胚胎放在激活液中，以0.85KV/cm的电击进行激活，即模拟精子入卵时的钙波动；将重构胚置于含有5ug/ml细胞松弛素与10ug/ml放线菌酮混合的培养液中处理4小时，抑制染色体排出，保证重构胚倍型；4小时后，将重构胚放在微穴培养体系中，在胚胎培养液中培养5天。