固定化铜绿假单胞菌及其制备方法和应用

摘要

本发明属于重金属污染废水的处理领域，具体公开了一种固定化铜绿假单胞菌，该固定化铜绿假单胞菌包括铜绿假单胞菌活菌和用于固定该菌的混合载体，混合载体为一包埋该活菌的球状物，混合载体主要由质量比为(50～60)∶(30～40)∶(1.6～6)的聚乙烯醇、海藻酸钙和多壁碳纳米管组成，其制备方法，包括以下步骤：先将聚乙烯醇、海藻酸钠、多壁碳纳米管与水混合配制成混合溶液，加热搅拌均匀，静置得到固定化试剂；向固定化试剂中添加铜绿假单胞菌得到菌液，再将菌液滴入到硝酸钙溶液得到固定铜绿假单胞菌微球；最后经冷冻解冻处理得到固定化铜绿假单胞菌。本发明的固定化铜绿假单胞菌可将六价铬还原成三价铬，不仅效率高、效果好，而且操作简单，无二次污染。

主权项

一种固定化铜绿假单胞菌的制备方法，包括以下步骤：（1）固定化试剂的制备：将聚乙烯醇、海藻酸钠、多壁碳纳米管与水混合配制成混合溶液，并控制所述聚乙烯醇、海藻酸钠、多壁碳纳米管在混合溶液中的浓度分别为60 g/L、40 g/L、4g/L；再将混合溶液加热搅拌至沸腾使其混合均匀，然后室温下静置24h得到固定化试剂；（2）固定微生物成球：向所述固定化试剂中添加铜绿假单胞菌并使其混合均匀得到菌液，该铜绿假单胞菌的添加量满足每100 mL固定化试剂中添加4～8 g湿重的铜绿假单胞菌，再将所述菌液滴入到质量浓度为4%的硝酸钙溶液中，反应1.5h后得到固定铜绿假单胞菌微球；所述的铜绿假单胞菌经过了以下活化和培养处理：先接种铜绿假单胞菌于基础培养基上，37℃活化36 h，然后在无菌操作下用接种环取两环上述活化过的铜绿假单胞菌到富集培养基中，37℃，150 rpm下培养20 h；所述基础培养基配方为：牛肉膏5 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠 10 g/L、琼脂20 g/L；所述富集培养基配方为：牛肉膏5 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠 10 g/L，用1 mol/L的NaOH调节pH值为7.0～7.4；（3）冷冻解冻处理：将清洗后的固定铜绿假单胞菌微球置于‑20℃以下进行冷冻处理24h以上，再转移到1℃～4℃环境下解冻，最后于室温下静置得到固定化铜绿假单胞菌。